[发明专利]视紫红质的编码序列、其表达载体构建及其应用

说明书

本发明提供了视紫红质的编码序列、其表达载体构建及其应用。具体地，本发明对RHO基因编码序列进行了针对性特殊优化设计，从而获得了一种特别适合在哺乳动物(如人)细胞(如感光细胞、视神经细胞)中高效表达RHO蛋白的核苷酸序列，并构建了一种表达正常人源RHO蛋白的重组AAV病毒。相对于未优化的编码序列，经过特殊优化后的RHO编码序列(SEQ ID NO.:1)的表达量显著提高，非常适合在哺乳动物(尤其是人)细胞内表达，能有效治疗视网膜色素变性。

技术领域

本发明涉及生物制剂领域，尤其涉及视紫红质的编码序列、其表达载体构建及其应用。

背景技术

视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)是视网膜感光细胞和色素上皮细胞变性导致进行性视野缺损的一组最常见的遗传性致盲性眼底疾病。患者多表现为夜盲、进行性视野缩小和视力下降，最终因视网膜感光细胞凋亡而导致视功能下降，甚至完全丧失。RP具有高度的遗传异质性和临床异质性,有散发、常染色体显性、常染色体隐性、X连锁遗传和双基因遗传等多种遗传方式。目前此病的发病率为1/3500,全世界至少100万人患有此病，其中中国人约占1/4左右,且发病人数程逐年上升趋势。40％-50％的患者为散发或单发,无家族发病史,称为散发性视网膜色素变性(sporadic retinitis pigmentosa,SRP)。X连锁遗传约占所有RP患者的6-20％。常染色体隐性遗传占5％-15％。常染色体显性遗传视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa，ADRP)占15％～25％。视紫红质(rhodopsin，RHO)基因突变在欧洲及北美占常染色体显性遗传视网膜色素变性(ADRP)的16％-25％,在中国和日本大约7％左右。RHO基因碱基的突变可造成RHO蛋白的氨基酸替换、终止、或缺失而引起RHO蛋白功能异常，从而引起视功能的紊乱。

因此，本领域亟需开发一种能够有效治疗视网膜色素变性的基因治疗方法和治疗药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够有效治疗视网膜色素变性的基因治疗方法和治疗药物。

本发明的另一目的是提供一种编码视紫红质的编码序列、载体及制备方法。

本发明的第一方面，提供了一种核苷酸序列，所述核苷酸序列编码视紫红质，且所述核苷酸序列选自下组：

(a)所述核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示；

(b)所述核苷酸序列与SEQ ID NO.:1所示的核苷酸序列有≥95％相同性，优选地≥98％，更优选地≥99％；和

(c)与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括DNA序列、cDNA序列、或mRNA序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括单链序列和双链序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括与SEQ ID NO.:1完全互补的核苷酸序列。

本发明的第二方面，提供了一种融合核酸，所述融合核酸包含如本发明第一方面所述的编码视紫红质的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述融合核酸还包含UTR序列。

在另一优选例中，所述UTR序列包括3’UTR和/或5’UTR。

在另一优选例中，所述融合核酸从5’端-3’端具有式I结构：

Z0-Z1-Z2    (I)

式中，

各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；

Z0为无、或5’UTR序列；