[发明专利]猪不同组织稳定表达的内参基因、其筛选方法及应用

说明书

本公开提供了猪不同组织稳定表达的内参基因，所述内参基因为Rps18、Rpl4、Ppia和Tbp。其中所述Rps18、Rpl4、Ppia和Tbp这四组内参基因在猪不同组织中具有表达稳定性优异的特点，可为在研究猪不同组织基因表达内水平上提供选择依据。

技术领域

本公开涉及生物工程技术领域，具体涉及猪不同组织稳定表达的内参基因、其筛选方法及应用。

背景技术

猪(sus scrofa)是肉类生产中一种重要的经济家畜。巴马小型猪是国内主要的小型猪品种之一，由于其遗传稳定性好、繁殖性能好、体重轻、体表白毛覆盖面积大、多个组织器官和生化指标与人类相似等特点，也成为研究人类疾病的理想动物模型。因此，在提高肉品质和人类疾病相关研究上，利用实时荧光定量PCR对巴马小型猪中的目标基因进行定量分析，准确的基因表达模式对基因功能分析具有重要意义。

其中实时荧光定量PCR(RT-qPCR)是检测细胞、组织mRNA表达的重要方法之一。该技术以其高灵敏度、特异性和准确性在研究中得到广泛应用。但是，很多因素，如：RNA的质量，纯度，不同样本量，酶的活性，PCR扩增效率都会影响RT-qPCR检测基因表达的结果。因此，为了减少定量检测结果的偏差，通常会选择特定的内参基因对目标基因的校正和归一化。理想的内参基因需在各种情况下保持稳定表达。在RT-qPCR结果分析时选择合适的内参基因可以提高基因表达检测的准确性和可重复性。理想的内参基因是在各个实验条件下，能在各个组织或者细胞中均能恒定表达的基因。而大量研究分析表明，大量潜在的内参基因的稳定性也是均有相对性的，在不同的细胞类型情况下，相同的内参基因的表达并不是恒定不变的。因此，在不同品种、组织和细胞类型以及不同实验条件下，选择合适且稳定的内参基因至关重要。

发明内容

本公开的一个目的是提供了猪不同组织稳定表达的内参基因、其筛选方法及应用，为猪不同组织内参基因的选择提供依据。

为实现上述目的，本公开的技术方案如下：

猪不同组织稳定表达的内参基因为：Rps18、Rpl4、Ppia和Tbp。

所述内参基因Rps18的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。

所述内参基因Rpl4的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

所述内参基因Ppia的核苷酸序列为SEQ ID NO:3。

所述内参基因Tbp的核苷酸序列为SEQ ID NO:4。

猪不同组织稳定表达的内参基因的筛选方法，其步骤包括：

(1)根据候选内参基因的核苷酸序列设计合成引物；

(2)采集猪不同组织，提取RNA，以RNA为模板反转录合成cDNA；

(3)以步骤(2)中所合成的cDNA为模板，使用步骤(1)中合成的引物进行qPCR扩增，得到Ct值，根据公式Q＝2^－ΔΔCt计算相对表达量；

(4)将步骤(3)中所得数据，利用GeNorm和NormFinder两种程序，进行内参基因稳定性的分析。

猪不同组织稳定表达的内参基因Rps18、Rpl4、Ppia和Tbp在研究猪不同组织基因表达水平上的应用。

本公开的有益效果是：提供了猪不同组织稳定表达的内参基因，所述内参基因为Rps18、Rpl4、Ppia和Tbp，这四组内参基因在猪不同组织中具有表达稳定性优异的特点，为在研究猪不同组织基因表达内水平上提供选择依据。

附图说明

图1为实施例1中9个候选内参基因的Ct值结果图。

图2为实施例2GeNorm分析候选基因表达稳定性结果图。