[发明专利]一种即用型培养装置的制备及灭菌方法

说明书

本发明涉及卫生检验细菌学检测技术领域，具体涉及一种用于即用型培养装置的制备及灭菌方法。我国现行大肠菌群、耐热大肠菌群及大肠埃希氏菌最可能数(MPN)检测标准中采用杜汉氏培养管对样品进行初发酵培养，该培养管在使用前需要将内置小倒管中的气泡完全排出，操作费时费力。本申请提供了一种产气管外置的培养管，大大降低了使用前排气的难度，生产商可直接充入培养基制备成为一种即用型的培养管，本申请针对该即用型的培养管提供了一种制备方法及灭菌方法，采用本申请中的灭菌方法，可以一次性完成大批量产品的灭菌，节约灭菌步骤，提高生产效率差。

技术领域

本发明涉及卫生检验细菌学检测技术领域，特别是涉及一种大肠菌群、耐热大肠菌群及大肠埃希氏菌最可能数（MPN）检测的即用型培养装置的制备及灭菌方法。

背景技术

水、食品、化妆品和公共场所等公共产品的卫生微生物指标中大肠菌群、耐热大肠菌群（粪大肠菌群）及大肠埃希氏菌检测包括多管发酵最可能数（MPN）法、滤膜法、平板计数法、酶底物法等。而其中多管发酵最可能数（MPN）法以其技术难度低、试剂成本低、检测范围宽等优点获得了广泛应用，特别是在小型实验室应用中优势突出。在我国《GB/T5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标》中总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌的检验，《GB 4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》，《GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数》，《GB/T 18204.10-2000 游泳池水微生物检验方法大肠菌群测定》，《水和废水监测分析方法（第四版）》中水中总大肠菌群的测定和水中粪大肠菌群的测定等中多管发酵最可能数（MPN）法均为第一法；在《化妆品安全技术规范(2015版)》中粪大肠菌群检验，《GB 4789.39-2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数》，《GB/T 18204.4-2013公共场所卫生检验方法第四部分：公共用品用具微生物》中大肠菌群多管发酵法，《GB-18466-2005 医疗机构水污染物排放标准》附录A（规范性附录）医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法中多管发酵最可能数（MPN）法等中均为唯一方法。

多管发酵最可能数（MPN）法的基本实验流程包括初发酵、平板分离和复发酵，以大肠菌群能发酵乳糖产酸产气的生化特征为基础，通过培养大肠菌群一段时间后观察产酸产气现象。现在的检测过程中一般采用内置小倒管（倒置杜汉氏管）的含乳糖类培养基（如乳糖蛋白胨培养基、乳糖胆盐发酵培养基、乳糖胆盐发酵培养基（含中和剂）、煌绿乳糖胆盐肉汤、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、乳糖肉汤、现隐肉汤等）的试管培养受试样本，观察产酸产气的效果，培养所用试管需要使用前实验室自制，即实验室自行配制培养基、将杜汉氏管倒置装入试管中、分装培养基、高压灭菌除气、培养后洗刷杜汉氏管等过程，程序复杂，耗费大量人工。制约该培养管即用型商品化的技术瓶颈在于目前使用的杜汉氏管如图1所示，在细长的培养管中倒置一只小试管，若生产商制备后的成品培养管，经运输等震荡后空气易进入小倒管，而小倒管口径较小且与发酵试管呈180夹角倒置状态，使用前气体排出较难，需要依靠熟练的实验人员选取好合适的角度，缓慢充入液体，压出气体，每支管均需谨慎操作，要较长的时间。发明人为了解决上述瓶颈技术在本申请同日提交的专利中提供了一种用于最可能数法检测菌群的即用型培养装置，采用外置型的产气管，通过弯接管与主管连接，是产气管的内径与倒置角度选择自由度变大，可以显著的降低排除产气管中气泡的难度。

发明内容

本申请涉及的培养管具有硬质主管与硬质产气管，通过弯接管连接，采用封闭的硬质产气管代替现有技术中的内置小倒管，不再置于发酵管内部，不再受内置管径限制和倒置位置限制；从而使硬质产气收集管的内径和倒置角度选择自由度变大，使发酵用硬质主管与硬质产气收集管的管道连接更为通畅，便于气体排出。该培养管应用于工业生产，制造商在生产完毕后装入干粉培养基后密封包装即可，技术人员使用时只需打开包装加入适当溶剂的水即可使用，快速高效、省时省力。

针对以上技术方案，本申请进一步提供该即用型发酵培养管的制备方法及灭菌方法，采用本申请中的灭菌方法可以实现一次性大批量的灭菌，节约生产步骤。