[发明专利]一种检测ESR2基因多态性的探针及方法

说明书

本发明公开了一种检测ESR2基因多态性的方法，包括以下步骤：确定ESR2基因突变位点；根据突变位点设计并合成探针和引物；将被检测的ESR2目标基因、探针、引物和酶混合进行荧光定量PCR，并监测荧光信号；计算杂交峰所显示的Tm值，根据Tm值判断ESR2基因的类型；本发明还公开了一种用于检测ESR2基因多态性的探针，探针的核苷酸序列包括SEQ ID NO.3；本发明提供了操作简单、可快速检测ESR2基因多态性的探针及方法。

技术领域

本发明涉及一种检测ESR2基因多态性的探针及方法。

背景技术

乳腺癌是女性健康的巨大“头号杀手”，全球每年有50万妇女死于这种癌症。该病大多数发生在40-60岁，即更年期前后的妇女。全世界乳腺癌发生率正以每年0.2％-3％的幅度上升，2012年新增乳腺癌发病数170万。在欧美等西方发达国家，乳腺癌已成为妇女的主要死因之一，每8-10名妇女中，就有1人在其一生中将患乳腺癌。在我国，乳腺癌的发病率也呈逐年上升的趋势，达到 42.55/10万，在北京、上海、天津等大城市，乳腺癌已成为妇女恶性肿瘤发病的首位。散发性乳腺癌的发生不仅与个体遗传易感性有关，而且与某些环境因素如雌激素暴露水平、吸烟、婚育、哺乳、生活方式、饮食习惯等具有相关性。

ESR基因编码的雌激素受体蛋白是一种受雌激素激活的转录因子，ESR 一旦与雌激素结合，就会刺激靶基因转录，进而调控基因表达，ESR介导的信号传导在乳腺癌的发生发展中起着重要作用。ESR2在癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织，研究发现其与乳腺癌的发生密切相关。ESR2基因多态性的研究有利于建立对个体发生散发性乳腺癌风险的评估，以便于实现早期预防和治疗。

目前普遍应用的ESR2基因突变检测方法为DNA直接测序法，PCR产物直接进行DNA序列分析，可以明确突变位点，但存在费时费力，成本较昂贵，不适用于对大量样本进行检测等缺点。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明利用一种可以特异识别核酸序列的荧光标记探针，通过与靶序列进行杂交后发生构象的变化而释放荧光染料，根据杂交后产生不同温度的峰图判定分型结果。在没有靶DNA存在的情况下，荧光基团与淬灭基团可以稳定地结合在一起，检测不到荧光信号；当有靶DNA存在时，荧光标记探针结构被破坏，荧光基团与淬灭基团相互分离，即可检测到荧光信号；本发明提供了操作简单、可快速检测ESR2基因多态性的探针及方法。

本发明还提供了一种检测ESR2基因多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

L1确定ESR2基因突变位点；

L2根据突变位点设计并合成探针和引物

L3将被检测的ESR2目标基因、探针、引物和酶混合进行荧光定量PCR，并监测荧光信号；

L4计算杂交峰所显示的Tm值，根据Tm值判断ESR2基因的类型。

优选地，所述的ESR2基因突变位点包括rs1256054。

优选地，所述的引物包括本发明提供的引物包括：

5′-GCAACGGGTCACGTACGCAA TAGGGATGAGGGGAAATGCG-3′(SEQ ID NO.1)和5′-GCAACGGGTCACGTACGCAA CCCGATAAAACATGGCCCAG-3′(SEQ ID NO.2)。

优选地：所述的检测荧光信号的方法为：在PCR熔解温度为45-80℃时，每升温1℃记录3-5次荧光信号。

优选地，所述荧光定量PCR反应体系中每15μL含探针0.01-0.6μL，进一步优选为0.05-0.5μL，更进一步优选为0.07-0.1μL。