[发明专利]筛选人钾离子通道调节剂的方法

权利要求书

1.钾离子通道蛋白的融合蛋白，其特征在于，其具有N端区、跨膜区以及C端区，包括：线虫KQT-1的N端区第1～130位氨基酸残基、人KCNQ2的S1-S6跨膜区第75～347位氨基酸残基和线虫KQT-1的C端区第405～739氨基酸残基；其中，人KCNQ2蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示；所述线虫KQT-1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的跨膜区序列中存在通道功能获得性突变，其中所述突变是人KCNQ2蛋白第201位上的R201C突变。

3. 如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO:3所示；其cDNA序列如SEQ ID NO:5所示。

4. 如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述含有功能获得性突变的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，其cDNA序列如SEQ ID NO:6所示。

5.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，其还含有可被检测的蛋白质。

6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述可被检测的蛋白质为酶。

7. 分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸选自：

(a)编码权利要求1～6中任一项所述的融合蛋白的多核苷酸序列；和

(b)与(a)的多核苷酸序列互补的序列。

8.一种表达构建物或表达载体，其包含权利要求7所述的多核苷酸。

9.基因工程细胞，其包含权利要求7所述的多核苷酸或转入了权利要求8述的表达载体。

10.如权利要求9所述的基因工程细胞，其特征在于，所述的基因工程细胞中，ifd-2和/或c15c7.5基因或其编码的蛋白被下调。

11.如权利要求10所述的基因工程细胞，其特征在于，所述ifd-2和/或c15c7.5基因或其编码的蛋白藉由RNAi干扰、CRISPR/Cas9基因编辑、基因敲除、抗体靶向结合的方式被下调。

12.权利要求1～6中任一项所述的融合蛋白、权利要求7所述的多核苷酸、权利要求8所述的表达构建物或表达载体或权利要求9-11任一所述的基因工程细胞的用途，用于筛选人KCNQ2通道的抑制剂或激活剂，或用于制备筛选人KCNQ2通道的抑制剂或激活剂的筛选模型。

13.一种筛选人钾离子通道抑制剂和激活剂的方法，其中所述钾离子通道为KCNQ2，该方法包括：

所述筛选人KCNQ2通道抑制剂和激活剂的方法包括：使待筛选的化合物与表达权利要求1中所述的融合蛋白的转基因线虫共同孵育，并观察、比较共同孵育前和共同孵育后线虫的行为表现；与共同孵育前相比，共同孵育后使共同孵育前的线虫的行为缺陷得以改善或恢复的化合物鉴别为KCNQ2通道的抑制剂；共同孵育后使共同孵育前的线虫的行为缺陷加重的化合物鉴别为KCNQ2通道的激活剂。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的转基因线虫中，ifd-2和/或c15c7.5基因被下调。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，藉由RNAi干扰、CRISPR/Cas9基因编辑、基因敲除、抗体靶向结合的方式下调ifd-2和/或c15c7.5基因。