[发明专利]基于气相色谱-同位素稀释红外光谱的化合物含量计量基准方法

说明书

本发明公开了一种基于气相色谱‑同位素稀释红外光谱的化合物含量计量基准方法，包括如下步骤：(1)准备样品、待测目标物的标准品和同位素标记物；(2)根据样品中目标物的含量，配制与其含量接近的标准品溶液和同位素标记物溶液；(3)取一定量的样品，在样品中加入同等量的同位素标记物溶液，准确称量各自质量；采用单点法或括号法校准；按照同样的过程配制混合标准溶液；(4)将配制好的含有标记物的样品、标准混合溶液分别进行气相色谱‑红外光谱分析；(5)分析完成后，选取出峰时间段进行谱图累加，得到出峰时间段的红外光谱图，从红外光谱图上得到非标记的目标物与标记物特征峰处的红外吸光度；(6)计算样品中目标物的浓度。

技术领域

本发明涉及生物化学检测领域，特别是涉及一种基于气相色谱-同位素稀释红外光谱的化合物含量计量基准方法。

背景技术

计量是实现单位统一、量值准确可靠的活动，研究建立高准确度的测量方法是计量学研究的重要内容之一。基准测量方法是一种具有最高计量学品质的测量方法，其操作可以被完全地描述和理解，最终不确定度可以用SI单位表述，测量结果不依赖被测量的测量标准。基准方法是形成量值源头的依据。

随着生物技术的发展，生命科学已经经历了从“描述生物学”向“实验生物学”再向“创造生物学”发展的过程，当今的生命科学已经成为了精准分析和定量的科学。人们借助信息技术和工程学的帮助，依靠对生命体的各类生命现象的准确分析、精确定量，得以实现对生命体全方位的调控与干预。

通过建立量值溯源传递体系来保证检测结果的准确一致已经成为共识，是计量界的通行做法并在传统的物理计量与化学计量领域得到广泛和成功的应用。例如，美国国家计量院NIST通过胆固醇计划的实施建立了国内的胆固醇的量值溯源传递体系，使得临床胆固醇检测假阳性率从1949年的23.7％下降到2000年的3％，不仅每年可以节约近1亿美元的检测费用，而且极大程度的保护了国民健康。

量值溯源传递体系的建立一是要有量值的源头，二是要有量值传递方法，尤其是要有具有较高测量准确度的“基准”方法，才能保证国家基准复现的量值能够准确的传递到下一级的标准物质或工作计量器具上。因此，高准确度的计量方法研究在计量及量值溯源传递中具有举足轻重的作用。

1995年国际计量局物质的量咨询委员会(CCQM)首次会议上，国际计量局原局长T.J.Quinn对“基准方法”进行了定义：基准方法(Primary Method)是具有最高计量品质(也即最高的准确度)的方法，成为基准方法具有两个特征，第一是操作可以被完全地描述和理解，第二是不确定度可直接用SI单位(International System of Units)表述。因此，CCQM认定只有重量法、同位素稀释质谱法、库仑法、凝固点下降法和滴定法5种方法是基准方法。CCQM在1998年根据基准方法的定义，将基准方法进一步分为直接基准法和比例基准法。

直接基准法是指在测量未知物含量时不需要相同的标准作为参考，所得到的测量结果能够直接溯源至SI单位(如重量法和库仑法)。

比例基准法则是通过测量未知物与已知量的比例进行定量，需要以相同量的测量结果作为参考标准，其操作必须通过测量等式完全描述(如同位素稀释质谱法)。参考量的测量结果可以直接溯源至SI单位，与比例基准法结合后便可以保证测量结果能够直接溯源到SI单位。同时，如果一个方法的操作不能通过测量等式完全描述，则不能作为比例基准方法。

在基准方法的定义中“最高计量品质”要求基准方法的测量结果应具有足够小的测量不确定度，同时测量结果能够溯源至SI单位。而“不确定度表述”则要求方法的操作测量等式可以以SI单位进行表达，从而保证不确定度溯源的完整性。Quinn博士提出“用基准方法的定义测定物质的量是非常复杂的”。因此CCQM认为基准方法需要至少满足下述两个条件：首先，基准方法对定义的物质必须是特定的；其次，所有参数、依赖其他物质或基体的修正数值，必须是已知的或能以适当的不确定度进行计算。