[发明专利]靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体及其在制备预防或治疗恶性肿瘤药物中的用途

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体及其在制备预防或治疗恶性肿瘤药物中的用途。本发明的靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体的组成依次包括：人CD8α信号肽、结合叶酸受体α的多肽、人免疫球蛋白G1Fc段、人CD8α铰链区、人CD28跨膜段、人CD28胞内段、人CD137胞内段和人CD3ζ胞内段。本发明将上述嵌合抗原受体导入NK‑92细胞，可以特异性识别并杀伤叶酸受体α表达阳性的人肿瘤细胞系及人卵巢癌移植瘤模型。本发明提供了一种安全、特异、有效的嵌合抗原受体，并修饰NK‑92细胞，在叶酸受体α阳性恶性肿瘤的临床治疗中极具应用潜力。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体及其在制备预防或治疗恶性肿瘤药物中的用途。

背景技术

随着肿瘤免疫学理论和技术的发展，免疫治疗中的过继性细胞治疗(Adoptivecellular therapy,ACT)在肿瘤治疗中的作用日益受到重视。尤其是近年来兴起的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)技术进展迅猛，CAR修饰的免疫细胞在体外和临床试验中均表现出显著优于传统ACT的肿瘤杀伤活性，引发了肿瘤治疗转化研究的新高潮。

CAR通常包含靶向识别肿瘤抗原的单链可变区(single-chain variablefragment，scFv)(来自于抗体)和不同的胞内信号结构域(来源于淋巴细胞活化受体)。基于这种特殊的结构，表达CAR的免疫效应细胞能不依赖于MHC限制性和抗原呈递而特异性识别并杀伤肿瘤细胞。已有多项临床试验证实，CAR修饰的T细胞对白血病、淋巴瘤等多种恶性肿瘤有极佳的疗效。

目前，已发展出三代CAR结构。第一代CAR为胞内结构只含CD3ζ或FcεRIγ信号域，第二代、第三代CAR则是在第一代CAR结构的基础上将如CD28、CD134和CD137等共刺激分子结构域整合入CAR中。其中，CAR结构中包含一个共刺激分子结构域为第二代CAR，CAR结构中包含两个共刺激分子结构域为第三代CAR。

在利用CAR技术时，首先需要寻找合适的肿瘤抗原。而叶酸受体α(folatereceptorα，αFR)的表达和分布具有以下特点：①αFR在90％的卵巢癌中呈高表达状态，此外，还不同程度地表达于子宫内膜癌、乳腺癌、肺癌和结肠癌等上皮组织来源的恶性肿瘤中；②在卵巢癌中，αFR的表达水平不受化疗药物的影响，即在化疗药物使用前后，αFR均为高水平表达；③在正常组织中，αFR不表达或限制性低水平表达于极化的上皮细胞的顶面，而此处一般是循环系统中抗αFR抗体和叶酸偶联物难以到达的部位。基于此，αFR被认为是靶向治疗卵巢癌、肺癌和结肠癌等αFR阳性恶性肿瘤的理想肿瘤抗原。在前期研究中，研究者已构建了多种靶向αFR的单克隆抗体，以及靶向αFR的CAR-T细胞，并利用这些策略治疗卵巢癌，但遗憾地是，临床试验并未显示其具有明显疗效。这可能与靶向αFR的CAR分子转染并表达于T细胞的效率低下相关。另外，靶向αFR的CAR-T细胞只能个体化应用，导致制备成本昂贵，也制约其推广应用。

近期，有研究者发现，相比于T细胞，自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)或许是更好的CAR负载细胞，且NK细胞可用于异体，即可进行批量生产，批量应用，显著降低制备成本。但原代NK细胞具有与原代T细胞相同的缺陷，如，不同患者的NK细胞的扩增能力有高有低，差异明显。此外，原代NK细胞的外源基因转染效率低下并且存活时间有限，用作CAR负载细胞的效果都还有待提高。

发明内容

本发明要解决的技术问题为：构建高效稳定表达靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体的NK-92细胞株，并提供了嵌合抗原受体的制备方法和用途。

本发明解决上述技术问题的技术方案为：提供一种靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体的组成依次包括：人CD8α信号肽、结合叶酸受体α的多肽、人免疫球蛋白G1Fc段、人CD8α铰链区、人CD28跨膜段、人CD28胞内段、人CD137胞内段和人CD3ζ胞内段。