[发明专利]一种斑马鱼伤口检测方法

说明书

本发明涉及一种斑马鱼伤口检测方法，该方法包括以下步骤：(1)斑马鱼的准备：将斑马鱼割伤，制造创伤部位；(2)测试溶液的配制：制备荧光探针储备液和对照探针储备液，并利用PBS缓冲液分别将两种储备液稀释成荧光探针测试溶液和对照探针测试溶液；(3)斑马鱼伤口的检测：将两种测试溶液分别作为斑马鱼的培养用水，持续培养，并利用荧光显微镜分别采集记录荧光探针和对照探针在斑马鱼体内的荧光成像，将两组荧光成像进行对比，判断斑马鱼伤口情况。与现有技术相比，本发明不仅可以检测伤口情况，也可以用于监测伤口愈合情况，而且所用的检测探针细胞毒性小，具有方法简便、实用性强、快速准确等优点。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种斑马鱼伤口检测方法。

背景技术

斑马鱼属于脊椎动物，和人类基因极为相似，具有高达87％的同源性，可作为一种理想的动物模型(MEEKER,Nathan D.；TREDE,Nikolaus S.Immunology and zebrafish:spawning new models of human disease.DevelopmentalComparative Immunology,2008,32.7:745-757)。此外，斑马鱼体型小，易于养殖，产卵量高且繁殖周期短，这意味着大大降低了使用成本。斑马鱼的受精方式为体外受精，生长发育全程透明，有利于实时观察病原体和损伤。因而，斑马鱼可作为理想的炎症药物筛选模型。如通过构建由绿色荧光蛋白标记巨噬细胞的转基因斑马鱼系，筛选出其中绿色荧光蛋白表达稳定的斑马鱼，进一步切割尾部构建巨噬细胞聚集的炎症模型，通过追踪炎症细胞迁移，监测伤口愈合情况(秦帅,陈希,and孔德明.构建由绿色荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼模型.贵阳中医学院学报33.5(2011):133-135.)。类似的，通过构建中性粒细胞转基因斑马鱼系，可建立炎症反应的体内遗传分析模型(RENSHAW,Stephen A.,et al.A transgenic zebrafish model ofneutrophilic inflammation.Blood,2006,108.13:3976-3978)，从而追踪炎症反应。这一类构建炎症模型的方法基于机体受到刺激发生炎症反应，中性粒细胞和巨噬细胞向炎症部位聚集，通过追踪炎症细胞迁移，监测伤口愈合情况，筛选炎症药物。但是，这一类方法需要使用特殊转基因斑马鱼系，相较于普通斑马鱼成本较高，且后续测试繁琐。因而，开发一种用于快速检测斑马鱼伤口及监测伤口愈合情况的简便方法具有非常重要的意义。

近年来，荧光检测技术发展迅速，已广泛应用到食品检测、分子生物学、医学、临床诊断和环境监测分析等领域。荧光分析法是一种利用待测定组分荧光光谱性质进行定量或定性的化学分析方法，具有灵敏度高、选择性好、方法简便、快速准确、线性范围宽等优点。

专利CN105105716A公开了一种用于检测伤口愈合程度的智能传感器及其制备方法。该智能传感器包括第一多模光纤、第二多模光纤及单模光纤，单模光纤位于第一多模光纤及第二多模光纤之间并形成直线连接。其中，单模光纤表面涂覆有一层基质金属蛋白酶感应膜，该层基质金属蛋白酶感应膜根据皮肤伤口的基质金属蛋白酶的活性程度变化导致基质金属蛋白酶感应膜的颜色变化对第一波长光进行吸收。第二多模光纤将被所述单模光纤中的基质金属蛋白酶感应膜吸收后的第一波长光送至监测设备来确定皮肤伤口的愈合程度。该发明的装置结构复杂，操作比较不方便，而且无法快速准确的确知伤口愈合程度。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题而提供一种斑马鱼伤口检测方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种斑马鱼伤口检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)斑马鱼的准备：用一次性无菌手术刀片将斑马鱼割伤，制造创伤部位；

(2)测试溶液的配制：制备荧光探针储备液和对照探针储备液，并利用PBS缓冲液分别将两种储备液稀释成荧光探针测试溶液和对照探针测试溶液；