[发明专利]一种三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统及其制备方法与应用有效
| 申请号: | 201910093006.0 | 申请日: | 2019-01-30 |
| 公开(公告)号: | CN109735569B | 公开(公告)日: | 2023-03-28 |
| 发明(设计)人: | 李学义;彭晓欣;王晓龙 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学 |
| 主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;G01N33/68 |
| 代理公司: | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人: | 许亦琳;余明伟 |
| 地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 分子 荧光 互补 蛋白质 作用 感受器 表达 系统 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统,其特征在于,所述表达系统至少包括:第一目标基因元件-第二目标基因元件-监测器元件,所述第一目标基因元件用于表达第一目标基因,所述第一目标基因元件包括GFPß11-第一目标序列,所述第二目标基因元件用于表达第二目标基因,所述第二目标基因元件包括GFPß10-第二目标序列,所述监测器元件用于将第一目标基因和第二目标基因在同一驱动子控制下表达,所述监测器元件包括IRES-GFPß1-9,所述GFPß11、GFPß10和GFPß1-9可分别拆分自GFP;
所述GFPß11的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;
所述GFPß10的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;
所述GFPß1-9的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;
所述IRES的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;
所述第一目标基因元件通过自切割肽与所述第二目标基因元件相连,所述自切割肽选自P2A;
所述第一目标序列的5,端上设有连接序列1,所述连接序列1的核苷酸序列如SEQ IDNO:6所示;
所述第二目标序列的5,端上设有连接序列2,所述连接序列2的核苷酸序列如SEQ IDNO:7所示。
2.如权利要求1所述的三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统,其特征在于,所述自切割肽选自猪捷申病毒1。
3.如权利要求1所述的三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统,其特征在于,所述表达系统为干扰慢病毒载体。
4.如权利要求3所述的三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统,其特征在于,所述表达系统为pLenti表达载体。
5.如权利要求1-4任一所述的三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统的制备方法,其特征在于,至少包括如下步骤:
采用基因合成的方式合成第一目标基因元件-第二目标基因元件;
构建监测器元件表达载体;
将第一目标基因元件-第二目标基因元件连接到所述监测器元件表达载体上,形成第一目标基因元件-第二目标基因元件-监测器元件表达系统。
6.如权利要求5所述的三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统的制备方法,其特征在于,所述第一目标基因元件通过自切割肽与所述第二目标基因元件相连。
7.如权利要求1-4任一所述三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统或权利要求5-6任一所述的三分子荧光互补蛋白质作用感受器表达系统的制备方法的用途,为用于检测蛋白质的相互作用。
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