[发明专利]一种ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒

说明书

本发明属于体外诊断试剂技术领域，提供了一种ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒。所述的ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，包括包被有抗H‑FABP单克隆抗体的酶标板、HRP标记的检测用抗H‑FABP多克隆抗体、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液、检测抗体稀释液。本发明的检测试剂盒灵敏度较高，试剂盒的最低检测限低至1pg/mL；本发明试剂盒均一性良好，稳定性高，批内变异系数小于10％，批间变异系数都小于5％。该试剂盒与血清中易干扰测试的血清总胆红素TBIL和甘油三酯TG的交叉反应很低，不会对H‑FABP的测量造成干扰。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，尤其涉及一种ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒。

背景技术

急性心肌梗死(AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌缺血坏死疾病，临床上多表现为剧烈而持久的胸骨后疼痛，严重时可并发心律失常、休克或心力衰竭，其病死率高、危害性大。

AMI通常发病突然且发展迅速，早发现、早治疗对缩小梗死面积，保护心脏功能有重大意义，可以说是挽救患者生命、提高患者预后的关键所在。

心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)为一种小分子蛋白质(15.0KD)是心肌细胞内的脂肪酸载体，是目前心肌早期缺血损伤性的敏感标志物之一。在心肌中的水平比骨骼肌高10倍。肾脏、肝脏和小肠中的水平很低。具有较好的心肌特异性。心肌损伤后心肌细胞对缺血、缺氧的敏感性增加。需动员脂肪酸供能，致使心肌细胞内心型脂肪酸结合蛋白水平增加，最终导致在血液中的水平升高。

AMI发生时，H-FABP在心肌缺血缺氧而尚未坏死时即可检测到，心肌受损后2h迅速升高，并于6h达到峰值，而在12～24h内恢复正常，相比较cTnI、CK-MB等其他心肌坏死血清生化标志物具有更高的时效性。

H-FABP是一种无酶活性的蛋白质，其定性检测与定量检测都需要借助免疫学方法。从最早的放射免疫法到最近的乳胶微粒增强免疫比浊法以及胶体金免疫技术在H-FABP测定中的应用，H-FABP的临床检测经历了一个检测速度越来越快。

1.放射免疫法

放射免疫法是最早被报道用于FABP定量检测的方法，Ockner等于1974年在研究IFABP时采用了放射免疫法，他们用14C标记抗血清与待测标本反应，通过测定免疫沉淀中放射性比活度来检测相应的I-FABP浓度。随后，Ockner等于1982年又利用相同的方法完成了L-FABP的定量检测。鉴于H-FABP与I-FABP和L-FABP相似的分子大小以及不同的抗原决定簇，此法应同样适用于H-FABP的定量检测。然而，放射免疫法准备及测定过程都较为繁琐，所需的放射性同位素价格昂贵且存在放射性污染，在临床检测中缺乏实用价值。

2.酶免疫法

(1)竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)：随着H-FABP单克隆抗体的制备成功，ELISA逐渐成为检测H-FABP的主流方法，由于H-FABP相对分子质量较小，竞争性ELISA最先进入人们的考虑范围并于1989年被Know lton等研制成功，实验采取鼠抗兔H-FABP单克隆抗体作为捕获抗体，用定量的过氧化物酶(HRP)标记的标准抗原与标本中的抗原竞争性结合捕获抗体，最后通过底物显色反应达到标本中抗原定量的目的，此方法检测时间长达16h，不能满足临床检测的需求，但是竞争性ELISA定量H-FABP血浆浓度的成功证明了基于单克隆抗体的ELISA用于H-FABP定量的可行性，为以后ELISA的改进积累了经验；