[发明专利]细胞营养液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种促进白发转黑的细胞营养液的制备方法，包括如下步骤：步骤一：成纤维细胞的原代分离；步骤二：成纤维细胞的扩大培养；步骤三：成纤维细胞的诱导培养；步骤四：收集细胞营养液；该促进白发转黑的细胞营养液的制备方法，克服了现有白发转黑药物存在的缺陷，所制备的细胞营养液优点在于：人成纤维细胞经过低剂量的UVB照射可以明显的增加其增殖、迁移、α‑MSH等因子的分泌，增强其培养基白发转黑的作用。采用脂肪干细胞条件培养液培养人成纤维细胞可以模拟后者在体内环境下的生存代谢过程，促进人成纤维细胞分泌更多利于毛囊健康的细胞因子；而且取材广泛，便于大范围进行临床推广。

技术领域

本发明属于营养液制备技术领域，具体涉及一种促进白发转黑的细胞营养液及其制备方法。

背景技术

白发是较为常见的一种毛发病,从青少年到老年皆可发生,通常呈散在性生长,严重者甚至满头全白。影响个人形象以及社交活动，给患者造成很大的心理压力。近年来，随着社会竞争增加以及环境逐渐恶化，白发发生比例上升，并且明显年轻化。白发的发生多与遗传、不良生活习惯、情绪不稳定、环境污染等多种因素导致的毛囊黑素细胞的黑色素生成与色素沉着障碍有关。现代医学认为白发的主要病变机制之一就是毛囊黑素细胞增殖受到抑制，细胞内的酪氨酸酶活性降低，导致黑色素合成减少所致。西医目前对本病尚无特效疗法,中医方剂虽然较多，但没有从毛囊黑素细胞的增殖、色素生成以及毛囊健康的角度去解决问题，所以效果并不显著。

目前乌须发的药物主要有三类，包括化学药物、中药和生物制剂。化学药物的乌须发作用机制主要包括物理沉积吸附、扩散和沉着，在头发上进行化学氧化反应将白发染黑，存在一定的毒性。中药可分为内服中药和外用中药，外用中药制剂研究较少，目前还是以传统汤剂为主，应用时不方便。生物制剂在药理方面研究较多且药效显著，但应用较少。用于乌须发的生物制剂主要有α-黑素细胞刺激素（α-MSH），腺苷环磷酸 (c AMP)， 内皮素-1(ET-1)等 。其中α-MSH对黑素细胞有广泛的刺激效应，可刺激黑素细胞的分裂，提高酪氨酸酶活性。α-MSH主要促进真黑素合成，可使毛囊黑素细胞由合成脱黑素转向合成真黑素，使毛发颜色由黄变黑。因此，α-MSH可有效的防止头发变灰变白。同时，α-MSH促进黑素细胞树突生长，帮助黑色素转移和扩散。

有研究表明，中波紫外线（290-380nm）或窄谱UVB（311-313nm）可刺激成纤维细胞合成和分泌α-MSH，并可刺激bFGF、IL-2等因子的产生，刺激毛囊外毛根鞘黑素细胞数量的增加和黑素生成。低剂量的UVB照射可以明显的增加人成纤维细胞的存活、迁移和分泌，从而增强其培养液促进白发转黑的能力。

毛囊是生长头发的囊状组织，随着对毛囊微观结构及白发转黑机理研究的深入，人们发现白发转黑过程也受到毛囊黑素细胞及毛囊周围细胞比如皮下脂肪组织细胞的影响调控。脂肪系细胞能激活毛囊干细胞，分泌生长因子调控毛囊干细胞微环境，促进毛囊正常生长。成纤维细胞（Fibroblast，Fb）是真皮层的一种具有增殖及分化能力的细胞，由胚胎时期的间充质细胞分化而来，也具有干细胞的特性，有明显的蛋白质合成和分泌功能，对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。如果能够将脂肪细胞与成纤维细胞的功能应用于促进白发转黑，将会克服现有白发转黑药物的缺陷。

发明内容

本发明的目的是针对现有白发转黑发药物的不足，提供了一种促进白发转黑的细胞营养液及其制备方法。

本发明提供一种细胞营养液，所述细胞营养液以成纤维细胞为原料制备而成；所述细胞营养液的制备过程具体包括：

1）成纤维细胞的原代分离：取新生儿包皮组织，置于磷酸盐缓冲液中漂洗、浸泡后，去除真皮下附着的结缔组织和毛细血管，然后依次用0.2%中性酶溶液、0.25%的胰蛋白酶消化处理后,加入含10%胎牛血清的完全培养基终止消化；离心,漂洗，重悬后，弃掉上清液，获得原代成纤维细胞；