[发明专利]检测待测基因甲基化的核酸组合物及其试剂盒和待测基因甲基化的检测方法

说明书

本发明涉及一种检测待测基因甲基化的核酸组合物及其试剂盒和待测基因甲基化的检测方法。该核酸组合物包括用于扩增待测基因中甲基化片段的扩增引物对；扩增引物对的正向引物从5’端到3’端包括正向识别片段与正向匹配片段，正向识别片段能够特异性识别核酸内切酶，正向匹配片段能够与甲基化片段的正义链互补配对，正向引物的两端分别连接有正向荧光基团和正向猝灭基团；扩增引物对的反向引物从5’端到3’端包括反向识别片段与反向匹配片段，反向识别片段能够特异性识别核酸内切酶，反向匹配片段能够与甲基化片段的反义链互补配对，反向引物的两端分别连接有反向荧光基团和反向猝灭基团。上述核酸组合物的敏感度较高。

技术领域

本发明涉及分子诊断领域，特别是涉及一种检测待测基因甲基化的核酸组合物及其试剂盒和待测基因甲基化的检测方法。

背景技术

肺癌的发生已成为威胁居民生命的恶性疾病，其发病率持续攀升而治疗效果往往不尽人意，因此加强癌症的早期诊断、治疗、预后等方面的研究至关重要。目前肺癌的筛查和诊断主要依赖影像学检查和组织细胞学检查，此外肿瘤分子标志物在肺癌的辅助诊断中也发挥重要作用。但是细胞学检查和X线胸片检查的敏感度偏低。

DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5’碳位共价键结合一个甲基基团。DNA甲基化是DNA修饰之一，是表观遗传学的重要组成部分。DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。DNA甲基化状态的改变是引起肿瘤的一个重要原因。通过检测肿瘤相关基因的甲基化以对肿瘤进行筛查和诊断，能够一定程度提高检测的敏感度，但仍然不能满足实际需求。

发明内容

基于此，有必提供一种敏感度较高的检测待测基因甲基化的核酸组合物。

此外，还有必要提供一种检测待测基因甲基化的试剂盒和待测基因甲基化的检测方法。

一种检测待测基因甲基化的核酸组合物，包括用于扩增待测基因中甲基化片段的扩增引物对；

所述扩增引物对的正向引物从5’端到3’端包括正向识别片段与正向匹配片段，所述正向识别片段能够特异性识别核酸内切酶，所述正向匹配片段能够与所述甲基化片段的正义链互补配对，所述正向引物的两端分别连接有正向荧光基团和正向猝灭基团；

所述扩增引物对的反向引物从5’端到3’端包括反向识别片段与反向匹配片段，所述反向识别片段能够特异性识别所述核酸内切酶，所述反向匹配片段能够与所述甲基化片段的反义链互补配对，所述反向引物的两端分别连接有反向荧光基团和反向猝灭基团。

上述检测待测基因甲基化的核酸组合物包括用于扩增待测基因中甲基化片段的扩增引物对，扩增引物对的正向引物从5’端到3’端包括正向识别片段与正向匹配片段，正向识别片段能够特异性识别核酸内切酶，正向匹配片段能够与甲基化片段的正义链互补配对，正向引物的两端分别连接有正向荧光基团和正向猝灭基团，使得正向引物不仅能够扩增甲基化片段，还能够作为探针，在核酸内切酶的作用下使得正向荧光基团和正向猝灭基团分离，以提供荧光信号而对待测基因的甲基化片段进行检测；同样地，扩增引物对的反向引物从5’端到3’端包括反向识别片段与反向匹配片段，反向识别片段能够特异性识别核酸内切酶，反向匹配片段能够与甲基化片段的反义链互补配对，反向引物的两端分别连接有反向荧光基团和反向猝灭基团，使得反向引物不仅能够扩增甲基化片段，还能够作为探针，在核酸内切酶的作用下使得反向荧光基团和反向猝灭基团分离，以提供荧光信号而对待测基因的甲基化片段进行检测。上述检测待测基因甲基化的核酸组合物能够有效地检测待测基因的甲基化情况，敏感度较高，特异性较强。经试验验证，采用上述检测待测基因甲基化的核酸组合物对60例样本进行检测，敏感度为90％，特异性为100％。

其中一个实施例中，所述核酸内切酶为PspGI核酸内切酶；

及/或，所述待测基因为hOGG1基因启动子序列。