[发明专利]获得巨核细胞及血小板的方法

说明书

本发明提出了获得巨核细胞及血小板的培养基、组合试剂、试剂盒及其用途和获得巨核细胞及血小板的方法，所述获得巨核细胞及血小板的培养基包括：基础培养基；以及式(1)所示的化合物。利用本发明的培养基可以诱导红系细胞重编程为巨核细胞，并进一步生成血小板，无需依赖转录因子，可以获得大量巨核细胞及血小板，具有广泛地应用前景。

技术领域

本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及获得巨核细胞及血小板的方法。更具体地，本发明涉及组合试剂、试剂盒、培养基及其用途和获得巨核细胞及血小板的方法。

背景技术

血小板是血液系统中成熟巨核细胞胞质片段化的活性产物，在机体止血、血栓形成、免疫调节等生理和病理过程中发挥重要作用。血小板减少是再生障碍性贫血、特发性血小板减少性紫癜等血液系统疾病以及放化疗过程中常见的并发症，血小板输注是临床治疗血小板减少的唯一手段。目前，常规血小板制剂主要来源于无偿献血者捐献的全血进行分离制备或采用成分分离制备机采集而来，健康供者来源有限、血小板贮存时间短且易被污染是制约血小板供给的重要因素，很多患者需要反复多次输注血小板进一步导致供需矛盾日益尖锐，因此迫切需要寻求血小板新来源。

近几年新兴发展的谱系重编程(Lineage reprogramming)技术能够将一种体细胞直接转变成另一种成体干/祖细胞或体细胞，无需经过多能干细胞阶段，不仅避免了多能干细胞体内成瘤的隐患，而且规避了利用iPSC获取目的细胞存在的诱导过程复杂、周期长、效率低等问题。

然而，目前获得巨核细胞及血小板的方法仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

在目前大部分的重编程研究中，诱导重编程的方式依赖于病毒介导的转录因子，这种对基因进行操作的方式带来很多安全性隐患。小分子化合物具有稳定、可控、廉价和安全的特性，在细胞重编程中的应用非常广泛。

有鉴于此，发明人尝试采用小分子化合物诱导红系细胞进行重编程，以便获得巨核细胞及血小板。但是，发明人发现，某些小分子化合物的诱导仍需要依赖于转录因子，或者虽然可以无需依赖转录因子，但是最终生成的血小板数量不多。进而，发明人经过深入研究发现，采用式(1)所示的化合物可以有效地使红系细胞重编程为巨核细胞，并进一步生成血小板，无需转录因子参与，并且巨核细胞及血小板的得率高。进一步地，式(2)和式(3)所示的化合物以及丙戊酸的至少之一与式(1)所示化合物组合使用，能够进一步提高重编程效率，所得到的巨核细胞及血小板的得率更高。

为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种获得巨核细胞的培养基。根据本发明的实施例，基础培养基；以及式(1)所示的化合物。采用式(1)所示的化合物可以有效地使红系细胞重编程为巨核细胞，并进一步生成血小板，无需转录因子参与，具有广泛地应用前景。

根据本发明的实施例，上述获得巨核细胞及血小板的培养基还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述培养基进一步包括下列的至少之一：式(2)所示的化合物、式(3)所示的化合物以及丙戊酸。

根据本发明的实施例，所述丙戊酸的浓度为0.1～0.3mM；所述式(1)所示化合物的浓度为0.3～0.7μM；所述式(2)所示化合物的浓度为0.02～0.07μM；所述式(3)所示化合物的浓度为0.2～0.7μM。

根据本发明的实施例，所述基础培养基选自StemSpan培养基，所述培养基进一步包括：重组人干细胞因子；白细胞介素-3；白细胞介素-6；以及促血小板生长因子。