[发明专利]CALB2及定量检测CALB2的试剂的应用及工具

说明书

本发明涉及CALB2作为肝癌转移检测分子靶点的应用。本发明发现高转移肝癌细胞株中CALB2表达量上调，定量检测CALB2可作为检测肝癌转移的用途。本发明的研究成果为临床医师制定个性化治疗方案提供理论基础，并且能够为抗肝癌转移药物的开发提供新的药物靶点。

技术领域

本发明属于分子生物学和肝癌防治领域，更具体而言，本发明涉及预测肝癌转移领域。本发明提供了CALB2可作为一种检测肝癌转移的应用，利用定量检测CALB2分子的表达可设计出预测肝癌转移的试剂。

背景技术

肝脏是人体物质代谢，能量转换及供应的枢纽和主导器官。癌症是人口死亡的第二位原因。肝癌发病率高而且死亡率高，其5年生存率仅5％-6％。目前原发性肝癌已上升为我国第二位癌症杀手。由于原发性肝癌早期一般无任何症状，一旦出现临床表现，病情大多已进入中期或晚期，而且恶性程度高、预后差、侵袭转移性强。临床数据显示，肝癌的高侵袭转移能力和术后高复发转移率是影响肝癌病人长期生存的重要因素。因此，肝癌转移是生命科学需要迫切解决的问题。

肝癌转移分为远处转移和肝内转移。转移进程大体包含肿瘤细胞获得向外侵袭的能力使得细胞脱离原发器官侵入周围组织并穿入淋巴管和血管；随循环系统运行，停留；肿瘤细胞增殖，形成转移灶。染色体水平的变化，癌基因表达增加，抑癌基因的失活，上皮细胞-间充质转化，肿瘤细胞间蛋白水解酶的合成，细胞与基底膜的黏着，免疫系统免疫识别低下，一些细胞因子及受体的改变等因素都可能促进肝癌的转移。细胞迁移与运动能力的提高是引起肿瘤侵入周围组织和发生远处转移的关键因素。但是，调控肝癌细胞运动侵袭能力的分子机制仍不明朗，难以开发出有效的抑制肝癌转移的药物，因此，寻找并发现肝癌转移相关蛋白用于转移和复发研究、药物靶标的设计，这对于实现肝癌病人生存率的提高，具有重要意义。

CALB2是一种钙结合蛋白，在听觉神经元中含量丰富。CALB2蛋白在多种细胞功能中起作用，包括信息靶向和细胞内钙缓冲，参与钙信号传导通路。Ca²⁺是协调内质网-线粒体的相互作用，调节细胞凋亡的信使。线粒体Ca²⁺动力学还参与细胞能量代谢的调节以及细胞运动和神经递质释放等过程。CALB2还是一种间皮瘤诊断标志(Doglioni C,etal.Calretinin:A Novel Immunocytochemical Marker for Mesothelioma.AmericanJournal of Surgical Pathology,1996,20(9):1037–1046；Chu A Y,et al，Utility ofD2-40,a novel mesothelial marker,in the diagnosis of malignantmesothelioma.Modern Pathology,2005,18(1):105–110.)。有研究显示，正常结肠上皮细胞中没有CALB2的表达，但在原发性结肠癌细胞中发现有表达(Gotzos V,et al.Selectivedistribution of calretinin in adenocarcinomas of the human colon and adjacenttissues.American Journal of Surgical Pathology,1999,23(6):701–711；Gotzos V,etal.Heterogeneity of expression of the calcium-binding protein calretinin inhuman colonic cancer cell lines.Anticancer Research,1996,16(6B):3491–3498.)。结直肠癌细胞经5-FU治疗后，CALB2可通过内在的线粒体途径参与凋亡诱导(Stevenson L,et al.Calbindin 2(CALB2)Regulates 5-Fluorouracil Sensitivity in ColorectalCancer by Modulating the Intrinsic Apoptotic Pathway.Plos One,2011,6(5):1575-1581.)。还有报道显示CALB2作为间质细胞内的因子,通过PLC-Ca²⁺-PKC信号通路参与调节类固醇激素的合成，并可能是通过加强PI3K-AKT和ERK l/2信号促进间质细胞增殖(Xu W,et al.Calretinin Participates in Regulating Steroidogenesis by PLC-Ca2+-PKCPathway in Leydig Cells.Scientific Reports,2018,8.)。然而目前，关于CALB2能否调控肝癌细胞的生长，迁移和侵袭以及如何调控，并没有报道。