[发明专利]一种S100B蛋白的检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液以及检测抗体稀释液。

2.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液中辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体的浓度为2-3mg/mL，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液的溶剂为浓度为0.15mol/L、pH＝7.4的磷酸缓冲盐溶液。

3.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液包括以下物质：质量分数为0.2％的明胶，质量分数为0.2％的酪蛋白，150mmol/L的NaCl，质量分数为0.01％的Tween-20，质量分数为5％的蔗糖，质量分数为0.5/1万的溴钾酚紫，质量分数为0.1％的防腐剂，余量为浓度20m mol/L、pH＝6.0的PBS缓冲液。

4.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液中Na₂HPO₄·12H₂O的浓度为116g/L，NaH₂PO₄·2H₂O的浓度为11.84g/L，NaCl的浓度为180g/L，吐温20的浓度为5mL/L，防腐剂的浓度为1mL/L，溶剂为水。

5.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，

所述显色液A的溶剂是水，溶质及其在所述显色液A中的浓度如下：柠檬酸7.28g/L，磷酸氢二钠23.75g/L，过氧化氢尿0.5g/L；

所述显色液B的溶剂是水，溶质及其在所述显色液B中的浓度如下：甲醇100mL/L，聚乙烯醇1g/L，Na₂S₂O₃1.5g/L，盐酸1mL/L，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的质量百分数为0.03％，二甲基亚砜的质量百分含量为1％。

6.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述终止液的溶剂是水，溶质及其在所述终止液中的浓度如下：硫酸200mL/1.8L，乙二胺四乙酸1.35g/1.8L。

7.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液的溶剂是20mM、pH7.4的PBS缓冲液，溶质及其在所述标准品稀释液中的浓度如下：质量百分含量1％的酪蛋白，质量百分含量8％的海藻糖，质量百分含量3％的甘露醇，1mmol/L EDTA，质量百分含量0.5％的甘氨酸，150mmol/L NaCl，质量百分含量0.1％的防腐剂Proclin-300。

8.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述检测抗体稀释液的溶剂是20mM、pH7.4的PBS缓冲液，溶质及其在所述检测抗体稀释液中的浓度如下：质量百分含量2％的牛血清白蛋白，质量百分含量0.1％的酪蛋白，150mmol/L的NaCl，质量百分含量0.01％的吐温20，质量百分含量5/1万的氨基比啉，质量百分含量1/20万的染料，质量百分含量0.1％的防腐剂Proclin-300。

9.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述标准品为S100B蛋白。

10.一种如权利要求1-9任一权利要求所述的S100B蛋白的检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制如下溶液：

用检测抗体稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液，使辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体与检测抗体稀释液的体积比为1:5000，得到酶结合物；

用标准品稀释液溶解标准品，得到多个浓度梯度变化的标准品溶液；

将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按照1:20的体积比稀释得到洗涤液；

(2)绘制标准曲线：

在包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板的相应孔中分别加入所述多个浓度梯度变化的标准品溶液各50μL，轻轻振荡混匀；

用封板膜封板后置37℃温育30分钟后，用所述洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液100μL，轻轻振荡混匀；

用封板膜封板后置37℃温育30分钟后，用所述洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

每孔加入显色液A、B液各50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；

每孔加终止液50μL，轻拍混匀，设定酶标仪波长于450nm处，用空白孔调零点后测定各孔光密度值；

使用双对数log-log线性拟和方式进行数据处理，以各校准品的光密度值的对数为纵坐标，各校准品的浓度的对数为横坐标作图，得到标准曲线；

(3)待测样品检测

在包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板的相应孔中待测样品各50μL，轻轻振荡混匀；

用封板膜封板后置37℃温育30分钟后，用所述洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

在所述孔中加入辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液100μL，轻轻振荡混匀；

用封板膜封板后置37℃温育30分钟后，用所述洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

在所述孔中加入显色液A、B液各50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；

在所述孔中加终止液50μL，轻拍混匀，设定酶标仪波长于450nm处，用空白孔调零点后测定光密度值；

将待测样本溶液的光密度值代入标准曲线，得到待测样本溶液中S100B的含量。