[发明专利]一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法

说明书

一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法，包括：以来源不同的高感褐锈病甘蔗品种作母本×高抗褐锈病不含Bru1基因的甘蔗品种作父本配制组合杂交得到F1代种子，经播种、筛选真实性杂交F1代、种植真实性杂交F1代单株、接种褐锈病病菌、调查发病情况、按9级标准评价抗性、分析真实性杂交F1代群体抗病遗传，选取杂交后代遗传分离群体抗感分离比≈3:1的真实性杂交F1代群体为甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体。本发明方法首次建立了一套系统性构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法，其程序简化，可操作性强，构建的真实性杂交F1群体抗感分离比≈3:1，其抗病基因由显性单基因控制，可用于抗褐锈病基因定位。

技术领域

本发明属于作物抗病基因定位技术领域，具体涉及一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法。

背景技术

甘蔗褐锈病是由黑顶柄锈菌(Puccina.melanocephala H.Sydow&P.Sydow)引起的一种重要病害，在我国甘蔗主产区常发生流行，造成巨大的经济损失，严重影响着蔗糖产业的可持续发展。甘蔗褐锈病主要表现为蔗叶出现大量红褐色病斑，病斑合并形成大幅不定形的坏死区域，结果蔗叶未熟先死，甚至嫩叶也是这样。

甘蔗褐锈病的发生流行与品种抗病性密切相关，大面积种植感病品种是病害流行的重要原因。生产上，大面积施药防治甘蔗褐锈病非常困难，且收效甚微，选育和种植抗病品种是防治甘蔗褐锈病最经济有效的措施，前期研究发现有些甘蔗品种其具有高抗褐锈病特性，经分子标记检测分析未检测到已发现的褐锈病抗性基因Bru1，预示这些甘蔗品种可能含有新的抗褐锈病基因，发掘利用这些抗病种质资源是有效开展甘蔗抗褐锈病育种的基础和关键，利用其高抗褐锈病种质资源，研究明确其抗性遗传规律，发掘抗性基因资源十分必要。抗性基因的发掘与定位，可为抗褐锈病新基因的分离克隆及开展分子育种奠定基础，对有效防控甘蔗褐锈病和确保我国蔗糖产业持续稳定发展具有重要意义。而抗褐锈病基因发掘与定位的的基础和关键，需要开发建立简便、高效的遗传分离群体构建方法，构建用于抗褐锈病基因定位的遗传分离群体。

发明内容

针对甘蔗抗褐锈病基因发掘与定位的基础和关键，本发明提供一种简便、高效的构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法。

本发明的技术方案以下：

一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法，包括以下步骤：

(1)亲本选择:选取来源不同的高抗褐锈病不含Bru1基因的甘蔗品种和高感褐锈病甘蔗品种作为亲本；

(2)配制杂交组合杂交：以高感褐锈病甘蔗品种作母本×高抗褐锈病不含Bru1基因的甘蔗品种作父本配制杂交组合，通过杂交得到F1代种子；

(3)杂交组合亲本间多态性引物筛选：筛选出杂交组合在感病和抗病亲本间条带清晰、多态性明显、重复性好的SSR引物；

(4)筛选真实性杂交F1代群体：每个杂交组合F1代种子播种至少1000粒，利用步骤(3)所选的SSR引物对相应的杂交组合F1代种子苗进行杂交后代真实性鉴定，每个杂交组合筛选出真实性杂交F1代单株至少500苗；

(5)田间人工接种褐锈病病菌：田间种植真实性杂交F1代确保成活至少400苗，用褐锈病病菌孢子悬浮液于傍晚喷雾田间种植的真实性杂交F1代蔗叶接种；首次接种后，第二天按前述接种方式再接种1次；

(6)病情调查：接种4-5周后，调查记录各真实性杂交F1代单株发病情况，逐份材料进行调查，目测每份材料叶片褐锈病侵染面积百分率；