[发明专利]电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体

权利要求书

1.电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体，包括以下步骤：

S1、种子细胞的培养；

S2、三相一体支架的制备；

S3、细胞的种植：取适量骨髓间充质干细胞种植于各支架区域。

2.根据权利要求1所述的电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体，其特征在于：所述S1步骤中种子细胞的培养，骨髓间充质干细胞以含10％胎牛血清DMEM培养基培养于的孵箱中。

3.根据权利要求1所述的电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体，其特征在于：所述孵箱的温度为37℃，其孵箱内有5％CO2。

4.根据权利要求1所述的电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体，其特征在于：所述S2步骤中三相一体支架的制备包括一下步骤：

S21、模型的建立：使用三维打印软件建立打印模型，为多层圆柱形状，各层结构路径间隙各自根据需要进行调整，保存；

S22、材料的制备：量取适量的生物高分子材料A1、A2、A3，及微球B1、B2、B3，微球B1、B2、B3分别装载适量TGFβ1、BMP7、IGF细胞因子，及HA(羟基磷灰石)颗粒，得到微球B1’(B1+TGFβ1+BMP7)、B2’(B2+TGFβ1+IGF)、B3’(B3+TGFβ1+HA)，量取适量的微球分散剂，将分散剂均匀分散在水溶液中配成分散液，将微球B1’、B2’、B3’均匀分散于分散液中，分别用于制备表层、中深层及钙化层软骨；

S23、设备的准备：调校熔融静电纺丝三维打印设备的工艺参数，将步骤二的生物高分子材料A1和B1’分别置入两外接料筒，使生物高分子材料A1与微球B1’进入熔融静电纺丝三维打印设备的料筒内混合，启动设备进行熔融静电纺丝三维打印，由表层区开始打印，当表层区制备完毕后，将料筒内的材料更换为A2和B2’，对中深层区进行打印，完毕后使用A3和B3’对钙化层区进行打印，获得表层-中深层-钙化层三相一体支架。

5.根据权利要求4所述的电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体，其特征在于：所述S23步骤中三维打印设备的参数为；拉丝直径为10-50μm，打印温度根据材料的热属性进行调整，打印过程中料筒气压为600-1000KPa，负高压模块电压为-2.5～-50kV，打印结构由打印路径控制，打印路径为0/90°，打印空隙由打印路径间隔控制，间隔为100μm、150μm和200μm。

6.根据权利要求4所述的电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体，其特征在于：所述S22步骤中生物高分子材料A1、A2和A3由聚乳酸、聚己内酯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸-己内酯共聚物和聚对二氧环己酮中的一种或几种构成。

7.根据权利要求4所述的电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体，其特征在于：所述S22步骤中微球B1、B2和B3由壳聚糖、海藻酸、甲基丙烯酸环氧丙脂、聚多巴胺、聚乳酸、聚己内酯、聚苯乙烯、聚丙烯酸、二氧化硅、脲醛树脂、环糊精、淀粉、白蛋白、明胶和苯乙烯-二乙烯基苯共聚物中的一种或几种构成。

8.根据权利要求4所述的电纺3D打印制备含细胞因子微球的多层软骨复合体，其特征在于：所述S22步骤中微球分散剂为聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇中的一种或多种的混合物。