[发明专利]RNAi干扰片段、干扰载体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201910069205.8 | 申请日： | 2019-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN109735542A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 贾斌;席继锋;谭世新;袁立岗;蒋松 | 申请（专利权）人： | 石河子大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/66;C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京鼎佳达知识产权代理事务所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 王伟锋;张小勇 |
| 地址： | 832003 新疆维*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备方法和应用 干扰载体 受精 基因 生殖细胞 损伤 子代 雌性比率 精子细胞 转录因子 交配 公牛 精子 母牛 升高 蛋白 奶牛 发育 阻碍 | ||
1.一种RNAi干扰片段，用于干扰动物Y染色体上的Zfy基因，其特征在于，所述RNAi干扰片段包括以下序列：
AGTTCAAACTCTAGTGATT；
所述的Zfy基因负责编码的蛋白作为转录因子，与精子的发生有关。
2.权利要求1所述的RNAi干扰片段，其特征在于：
所述的RNAi干扰片段用于干扰公牛Y染色体上的Zfy基因。
3.一种RNAi干扰片段的应用，其特征在于：
根据权利要求1或2所述的一种RNAi干扰片段，所述的RNAi干扰片段用于制备控制动物性别的药物或试剂盒。
4.一种RNAi干扰载体，其特征在于，
所述的RNAi干扰载体具有权利要求1所述的RNAi干扰片段；
所述的RNAi干扰载体用于干扰动物Y染色体上的Zfy基因。
5.权利要求1所述的RNAi干扰载体，其特征在于：
所述的RNAi干扰载体用于干扰公牛Y染色体上的Zfy基因。
6.根据权利要求4或5所述的一种RNAi干扰载体，其特征在于：
所述的RNAi干扰载体包括pLentiLox3.7载体，所述的pLentiLox3.7载体与所述RNAi干扰片段连接。
7.一种RNAi干扰载体的应用，其特征在于：
所述的RNAi干扰载体在动物受精前用于性别控制，所述的RNAi干扰载体为权利要求4-6任一项所述。
8.根据权利要求7所述的一种RNAi干扰载体的应用，其特征在于，
所述RNAi干扰载体以睾丸直接注射的方式注射至动物体内，用于干扰动物Y染色体上的Zfy基因。
9.根据权利要求8所述的一种RNAi干扰载体的应用，其特征在于，
所述RNAi干扰载体以睾丸直接注射的方式注射至公牛体内，用于干扰动物Y染色体上的Zfy基因。
10.一种RNAi干扰载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)酶切pLentiLox3.7载体；
(2)将所述RNAi干扰片段与酶切后的所述pLentiLox3.7载体连接，得到连接产物；
其中，所述RNAi干扰片段序列如权利要求1所述；
(3)将所述连接产物转化至感受态细胞中，并筛选出阳性克隆菌液；
对阳性克隆菌液进行测序鉴定，并将测序结果与所述RNAi干扰片段序列完全一致的菌液进行扩增；
(4)从所述扩增的菌液中提取RNAi干扰载体。
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