[发明专利]标记细胞膜表面及研究细胞-细胞相互作用的酶和方法有效
| 申请号： | 201910067616.3 | 申请日： | 2019-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN109797194B | 公开（公告）日： | 2021-07-09 |
| 发明（设计）人： | 陈鹏;陈龙;葛韵;刘士博 | 申请（专利权）人： | 北京大学 |
| 主分类号： | C12Q1/48 | 分类号： | C12Q1/48;C12Q1/02;C12N9/10 |
| 代理公司： | 北京万象新悦知识产权代理有限公司 11360 | 代理人： | 李稚婷 |
| 地址： | 100871*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 标记 细胞膜 表面 研究 细胞 相互作用 方法 | ||
1.一种细胞-细胞相互作用的检测方法，通过基因改造的方法使将金黄色葡萄球菌分选酶A突变体展示在第一种细胞的表面，在pH 6.5~7.5的PBS缓冲液中室温共孵育第一种细胞和第二种细胞，并加入带有LPXTG序列的标记分子进行标记，其中X代表任意氨基酸；孵育一定时间后清洗细胞，检测第二种细胞表面是否被标记分子标记，若是，说明第一种细胞和第二种细胞之间发生了相互作用；
所述金黄色葡萄球菌分选酶A突变体是下述突变体之一：
突变体1：P94R/ D124G/D160N/D165A/Y187L/E189R/K190E/K196T/F200L；
突变体2：P94R/ D124G/D160N/D165A/Y187L/E189R/K190E/K196T/F200L；
突变体3：P94R/E105K/E108Q/D124G/D160N/D165A/Y187L/E189R/K190E/K196T/F200L；
突变体4：P94R/E105K/E108Q/D124G/D160N/D165A/Y187L/E189R/K190E/K196T/F200L；
突变体5：P94R/E105K/E108A/D124G/D160N/D165A/Y187L/E189R/K190E/K196T/F200L；
突变体6：P94R/E105K/E108A/D124G/D160N/D165A/Y187L/E189R/K190E/K196T/F200L；
其中突变体1、3、5是截去氮端25个氨基酸残基的截短体；突变体2、4、6是截去氮端59个氨基酸残基的截短体；
所述金黄色葡萄球菌分选酶A突变体是序列表中SEQ ID No：1至SEQ ID No：6中任意一个所示氨基酸序列的蛋白质。
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