[发明专利]Ddx5基因缺失的生精障碍小鼠模型及其构建方法

说明书

本发明提供一种Ddx5基因缺失的生精障碍小鼠模型及其构建方法，发明人在研究中发现，Ddx5基因与生精障碍或生育功能障碍之间存在关系，Ddx5基因缺失的雄性小鼠的睾丸的体积比野生型小鼠显著减小，而且其小鼠睾丸中无生殖细胞，附睾中无精子存在，与雌性小鼠交配后，无法得到任何后代。因此，Ddx5基因缺失的雄性小鼠具有稳定、生精功能抑制彻底的优点，是一种很好的雄性生育障碍疾病的研究模型。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种Ddx5基因缺失的生精障碍小鼠模型及其构建方法。

背景技术

随着现代社会经济的发展、人们生活方式的改变和自然环境的恶化，不育症发病率逐渐升高，目前世界已婚夫妇中约有15％不育。其中男性不育症已成为临床上常见的性医学疾病。研究并建立男性不育症研究的动物模型为探明疾病病因、发病机制和治疗药物开发具有重要意义。

目前生精障碍模型建立方法包括物理方法，如热效应和微波辐射法；化学方法，如雷公藤多苷、白消安、雌激素等；免疫方法，如实验性抗精子抗体模型；手术方法，如实验性隐睾模型和转基因技术，如Berk基因敲除鼠。但不同的造模方法均有其弊端，比如化学方法对机体其他系统功能的损伤，物理方法对生精功能的抑制不彻底。因此，构建出稳定、副作用小、影响机制明确的生精障碍动物模型对于男性不育症的研究十分重要。

DDX5是DEAD box蛋白家族中高度保守ATP依赖的RNA解旋酶，其不仅参与RNA调节的细胞过程，而且在转录调节中发挥重要作用。Ddx5在生物进化中高度保守，小鼠与人类的DDX5蛋白的相似性高达98％。DDX5可通过其 RNA解旋酶活性参与调节RNA的多种生物学功能，如：RNA可变剪接以及rRNA 和mRNA的加工等。有文献报道，DDX5可作为Drosha/DGCR8复合物的一个亚基参与调控小RNA的代谢。P53和SMAD等蛋白通过与DDX5相互作用从而参与小RNA的调节作用。DDX5通过影响微小RNA(microRNA)125b的表达水平，从而调控非经典PRC1复合物里的RING1和YY1结合蛋白(RYBP)的表达水平抑制体细胞重编程。此外，DDX5也可不依赖RNA解旋酶的活性发挥功能。有文献报道，DDX5可以通过与雌激素受体互作参与调控雌激素。DDX5 还能与染色质绝缘子结合蛋白CTCF相互作用，并调控CTCF的染色质绝缘功能。目前，尚未有任何研究报道Ddx5基因与生精障碍或生育功能障碍之间的关系。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种Ddx5基因缺失的生精障碍小鼠模型及其构建方法。具体技术方案如下：

一种生精障碍小鼠模型，所述小鼠模型为Ddx5基因缺失的雄性小鼠。

在其中一些实施例中，所述Ddx5基因缺失的雄性小鼠由敲除小鼠的Ddx5 基因得到。

在其中一些实施例中，所述敲除小鼠的Ddx5基因的方法包括：基于Cre/loxP 的生殖系特异性敲除Ddx5基因、CRISPR/Cas9技术敲除Ddx5基因、TALEN技术敲除Ddx5基因。

在其中一些实施例中，所述敲除小鼠的Ddx5基因的方法：基于Cre/loxP的生殖系特异性敲除Ddx5基因。

在其中一些实施例中，所述基于Cre/loxP的生殖系特异性敲除Ddx5基因，包括以下步骤：

(1)选用生殖细胞特异基因驱动的外源Cre表达的转基因小鼠Vasa-Cre与 flox化的Ddx5转基因小鼠交配；所述flox化的Ddx5转基因小鼠的基因型为 Ddx5^flox/flox；获得生殖系特异敲除Ddx5的杂合子小鼠，所述杂合子小鼠的基因型为Ddx5^flox/+-Vasa-Cre；

(2)将所述生殖系特异敲除Ddx5的杂合子小鼠与flox化的Ddx5转基因小鼠交配，得生殖系特异敲除Ddx5的纯合子小鼠，所述纯合子小鼠的基因型为 Ddx5^flox/flox-Vasa-Cre，即得生精障碍小鼠模型。