[发明专利]一种改造BZLF1和改造LMP1的融合基因及其应用

说明书

本发明公开一种改造BZLF1和改造LMP1的融合基因及其应用，融合基因是将去除致癌基因、加入增强子的LMP1与去除庸余序列、加入增强子的BZLF1基因进行融合得到；将改造BZLF1和改造LMP1的融合基因序列引入pMVS穿梭质粒上，然后与BCG感受态细胞电转复苏后获得包含改造BZLF1和改造LMP1的融合基因的BCG疫苗；本发明构建的融合基因能够同时发挥LMP1和BZLF1基因诱导潜伏期EBV进入裂解期复制的作用，从而协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞；本发明得到的转化BCG疫苗在预防结核病的同时，具有杀伤鼻咽癌细胞，很好的预防治疗肿瘤的作用。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体说是一种改造BZLF1和改造LMP1的融合基因及其应用。

背景技术

研究表明，EB病毒（Epstein-barr virus，EBV）的感染与鼻咽癌、胃癌的发生关系密切，即刻早期基因（BZLF1）的表达可诱导病毒从潜伏期进入裂解期，所编码的蛋白是一种转录激活因子，EB病毒感染宿主细胞包括潜伏期和裂解期，在EB病毒阳性肿瘤细胞中，病毒一般处于潜伏期，其潜伏存在及其DNA与宿主细胞整合是导致肿瘤细胞发生的重要原因，人工诱导病毒由潜伏期进入裂解期，导致肿瘤细胞裂解死亡，有望成为治疗EB病毒相关肿瘤的新手段和新方法。将BZLF1重组后，感染EBV阳性肿瘤细胞，可以诱导肿瘤细胞中处于潜伏期的EB病毒进入裂解期，并开启病毒复制基质，导致EB病毒阳性肿瘤细胞裂解死亡，达到特异性杀伤肿瘤细胞的作用，但是现有的即刻早期基因（BZLF1）转录频率低，庸余序列多，影响了BZLF1的表达。

潜伏膜蛋白1（Latent membrane protein l，LMP1）是EB病毒编码的一种癌蛋白，能够组成激活各种信号通路，从而导致细胞生长不受控制，向癌细胞转化和对肿瘤的微环境造成影响，而羧基端功能区是LMP1癌基因的功能区，删除这个区域，LMP1将失去对B细胞转化的能力，对LMP1基因进行改造，去除其在致癌过程中起决定作用的C末端部分氨基酸，使其不再具有致癌性，但是仍然具有良好的免疫原性。

卡介苗（BCG）是由减毒牛型结核杆菌悬浮液制成的活菌苗，具有增强巨噬细胞活性，加强巨噬细胞杀灭肿瘤细胞的能力，活化T淋巴细胞，增强机体细胞免疫的功能，但是目前还未有研究将预防其他癌症的基因与其融合的报道，使卡介苗的功能单一。

如何将去除致癌部分基因、加入增强子的LMP1与去除庸余序列、加入增强子的BZLF1基因融合，并且增强机体的细胞免疫反应，同时发挥LMP1与BZLF1基因诱导潜伏期EBV进入裂解期复制的作用，从而协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞是目前亟待解决的问题；此外，将该基因序列在现有疫苗中复制并表达，制备既能够预防、治疗鼻咽癌又具有较高安全性的转化BCG疫苗，达到一次接种预防两种疾病的目的也是我们亟待解决的问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种改造BZLF1和改造LMP1的融合基因及其应用。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：

一种改造BZLF1和改造LMP1的融合基因，是将去除致癌基因、加入增强子的LMP1与去除庸余序列、加入增强子的BZLF1基因进行融合得到；

改造BZLF1和改造LMP1的融合基因的基因序列为：