[发明专利]一种用于分离脐带间充质干细胞的方法及其消化液在审
| 申请号： | 201910061224.6 | 申请日： | 2019-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN109628393A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 施琳 | 申请（专利权）人： | 汇麟生物科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 严诚 |
| 地址： | 100176 北京市北京经济技*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 消化液 脐带间充质干细胞 脐带 表面标志物 干细胞技术 透明质酸酶 细胞 分离效率 脐带组织 表达量 消化 | ||
1.一种用于分离脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，其包括脐带消化步骤；
所述脐带消化步骤包括：采用脐带消化液与分离后的脐带组织混合孵育；
所述脐带消化液包括有PBS、II型胶原酶、IV型胶原酶以及透明质酸酸，在所述脐带消化液中，II型胶原酶的浓度为0.05～0.5％，IV型胶原酶的浓度为0.05～0.5％，透明质酸酶的浓度为0.05～0.3％。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述脐带消化液中，II型胶原酶的浓度为0.1～0.3％，IV型胶原酶的浓度为0.1～0.3％，透明质酸酶的浓度为0.05～0.2％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述脐带消化步骤中，采用所述脐带消化液消化脐带组织后，得到未消化完的脐带组织以及第二消化液，采用150～350目的筛网过滤第二消化液，离心得到第二份消化后的细胞。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在采用所述脐带消化液消化脐带组织后，所述方法包括：将未消化完的脐带组织与胰酶混合，30～45℃恒温孵育后得到第三份消化后的细胞。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在采用所述脐带消化液消化脐带组织之前，所述方法包括：将脐带组织与胰酶混合，恒温孵育10～30min后得到第一份消化后的细胞。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在采用所述脐带消化液消化脐带组织之前，与脐带组织混合的胰酶的浓度为0.1％～0.4％。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在脐带组织与0.1～0.4％胰酶混合孵育后，所述方法包括：将采用150～350目的筛网过滤后，离心得到第一份消化后的细胞。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在脐带消化步骤后，所述方法包括有细胞培养步骤；
所述细胞培养步骤包括将以下1份或多份细胞培养繁殖：所述第一份消化后的细胞、所述第二份消化后的细胞以及所述第三份消化后的细胞。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在脐带消化步骤前，所述方法包括有脐带分离步骤；所述脐带分离步骤包括将脐带分离清洗，得到脐带组织。
10.一种用于分离脐带间充质干细胞的消化液，其特征在于，其包括有以下组分：PBS、II型胶原酶、IV型胶原酶以及透明质酸酶；
在所述消化液中，II型胶原酶的浓度为0.05～0.5％，IV型胶原酶的浓度为0.05～0.5％，透明质酸酶的浓度为0.05～0.3％。
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