[发明专利]一种饲料中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙胂的检测方法

说明书

本发明公开了一种液相色谱串联质谱法测定饲料中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙胂的方法，属于分析检测领域。待测样品加入提取液1％甲酸水–乙腈(25：75，V/V)涡动混匀，离心，重复提取两次，合并上清液，全部上清液在40℃下旋转蒸发浓缩至小于3mL，用10％甲醇水溶液定容至5mL，离心，上清液过滤膜后，利用高效液相色谱‑串联质谱仪测定。本发明具有较高的准确度、精确度和灵敏度，实现一针进样可同时检测饲料中的3种有机砷制剂。

技术领域

本发明属于分析检测领域，尤其涉及采用液相色谱串联质谱法测定饲料中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙胂的方法。

背景技术

有机砷制剂是畜禽生产中广泛应用的饲料添加剂，其种类主要有洛克沙胂、阿散酸、硝苯砷酸，具有抗菌、抗球虫、促进动物生长、提高饲料转化率和改善产品外观等作用。有机砷制剂的毒性较无机砷低，但大剂量、长时间使用可导致畜禽中毒，表现为中枢或外周神经系统失调，视神经萎缩，甚至失明，另外，有机砷不易被机体吸收，大部分以原形随排泄物进入生态环境，污染水体和土壤，通过食物链的蓄积可对人体造成潜在危害。欧盟最早宣布禁止使用含砷的饲料添加剂，我国农业部公告第2638号规定，自2019年5月1日起，禁止使用洛克沙胂、阿散酸的原料药及各种制剂。为了确保饲料及动物性食品安全，维护公共卫生和生态安全，建立饲料中有机砷的检测方法来监控其非法添加势在必行。

目前，对饲料中有机砷制剂的检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-电感耦合等离子质谱法。GB/T22146—2008公布了饲料中洛克沙胂的测定—高效液相色谱法，但该标准方法只能检测一种砷制剂，且灵敏度低，样品处理繁琐。本发明建立了采用高效液相串联质谱法同时测定饲料中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙胂的方法，对饲料的前处理和液相质谱方法进行了摸索和优化，使其灵敏度、准确度、精密度均满足残留分析方法的要求，填补了同时检测饲料中的3种有机胂制剂的空白。

发明内容

本发明的目的克服现有检测技术的不足，建立一种快速、灵敏、准确、可同时检测饲料中阿散酸、硝苯砷酸及洛克沙胂的高效液相色谱串联质谱法。

本发明为实现上述目的，采取的技术方案如下：

步骤一：称取待测样品加入提取液1％甲酸水–乙腈(25：75，V/V)涡动混匀，离心，重复提取两次，合并上清液，备用；

步骤二：上清液在40℃下旋转蒸发浓缩至小于3mL，用10％甲醇水溶液定容至5mL，离心，上清液过滤膜后，供高效液相色谱-串联质谱仪测定；

步骤三：高效液相色谱-串联质谱仪的测定，液相色谱选用phenomenexF5柱，采用0.1％甲酸乙腈和0.1％甲酸水体系，梯度洗脱，质谱条件采用正、负离子同时扫描进行多反应监测。

上述步骤一中甲酸的浓度有0％、0.1％、1％、2％，优选1％。

上述步骤一中1％甲酸水和乙腈比例有0：100，V/V、10：90，V/V、25：75，V/V、50：50，V/V，优选比例为25：75，V/V。

上述步骤二中旋转蒸发温度有30℃、40℃、50℃，优选40℃。

上述步骤二中甲醇水溶液浓度有10％、30％、50％，优选为10％甲醇水溶液。

上述步骤三优选的液相色谱条件为色谱柱phenomenexF5柱(3.0×50mm，2.6μm)；流动相为A：0.1％甲酸乙腈和B：0.1％甲酸水；梯度洗脱程序如下：

0～0.5min，A5％，B95％

0.5～3.5min，A5％～50％，B95％～50％

3.5～4.6min，A50％～95％，B50％～5％

4.6～6.0min，A95％～5％，B5％～95％