[发明专利]SH2D1A基因、sgRNA及其应用

说明书

本发明公开了SH2D1A基因及其sgRNA在制备恢复T细胞耗竭药物或制备抗肿瘤药物中的应用，涉及T细胞分子生物领域；本发明通过在不同耗竭程度的CD8+T细胞中表达差异最显著的基因的发现、检测及其应用，通过高通量RNA测序，发现SH2D1A在CD8+T细胞耗竭发生发展中具有重要调节作用，SH2D1A表达与CD8+T细胞耗竭的发生、发展密切相关；再根据SH2D1A的编码序列，设计合成sgRNA，通过与质粒载体结合，转化，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在CD8+T细胞中敲低SH2D1A，能够显著减少CD8+T细胞耗竭的发生，显著恢复耗竭的CD8+T细胞的抗肿瘤能力，可应用于制备抗肿瘤药物。

技术领域

本发明属于T细胞分子生物领域，具体而言，本发明具体涉及SH2D1A基因 及其sgRNA及其应用。

背景技术

原发性肝癌，是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率居于全球恶性肿瘤第 五位，致死率列第三位，按病理学分型可分为肝细胞型、胆管细胞型和混合型三 种，其中以肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)最为常见，占原发性 肝癌90％以上(Chen W,et al.Cancer statistics in China,2015.CA Cancer J Clin 2016；66:115-132.)。

导致HCC的主要病因为慢性活动性肝炎，包括乙型肝炎病毒(HBV)和丙 型肝炎病毒(HCV)导致的病毒性肝炎，酒精性肝炎及非酒精性脂肪肝性肝炎。 目前国内常见的肝细胞肝癌以HBV感染为主要途径。HCC以早期症状隐匿，复 发率高及预后不佳为主要特点(Llovet JM,et al.Advances in targeted therapies for hepatocellular carcinomain the genomic era.Nat Rev Clin Oncol 2015；12:408-424； Miltiadous O,etal.Progenitor cell markers predict outcome of patients with hepatocellularcarcinoma beyond Milan criteria undergoing liver transplantation.J Hepatol2015；63:1368-1377；Zhu AX,et al.HCC and angiogenesis:possible targets andfuture directions.Nat Rev Clin Oncol 2011；8:292-301.)。目前HCC的治疗方法 主要包括外科手术治疗、放疗、介入治疗及化学治疗等方式。近年兴起的免疫治 疗，通过调节机体的免疫系统，提高其对肿瘤细胞的杀伤能力以及改善肿瘤的免 疫抑制状态来实现对抗肿瘤的目的，因为在多种恶性肿瘤治疗中发挥了重要作用 而备受关注，被称为肿瘤治疗最有前途的发展方向，其在HCC治疗中的应用也 有相关的研究和报道(Greten TF,etal.Current concepts of immune based treatments for patients with HCC:frombasic science to novel treatment approaches.Gut 2015；64:842-848；Prieto J,etal.Immunological landscape and immunotherapy of hepatocellular carcinoma.NatRev Gastroenterol Hepatol 2015；12:681-700)。