[发明专利]一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法

说明书

本发明公开了一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，该方法以马蹄皮干粉为原料，经PBS浸泡、超声波破碎、蛋白酶水解、醇析和干燥制得马蹄皮硫酸多糖，能够将马蹄皮中的硫酸多糖有效提取，并通过正交优化参数，提高马蹄皮硫酸多糖的提取效率。本发明利用大量被废弃的马蹄皮为原料，制备硫酸多糖，为高值化利用天然资源开辟新途径，也为资源丰富成本低廉，且可规模化生产，满足医疗、保健及食品行业的工业需求。

技术领域

本发明涉及一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，属于天然药物的提取方法技术领域。

背景技术

目前，天然多糖化学修饰以提升水溶性和生物学活性，为多糖生物学领域的重要研究方向，其中多糖硫酸化尤为引人重视。大量的研究证实，硫酸化的天然多糖，不仅大大增强了其水溶性，各项生物学活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、抗凝血等，也均得到了显著性提升。然而，多糖的硫酸化修饰过程中所用化学试剂，无可避免会造成环境污染及对药物的不良影响。本发明所提取的是天然硫酸多糖，过程中极少量使用了有机试剂，不采用其他酸碱或硫酸化化学修饰剂，不仅避免了环境污染，也保护了天然硫酸多糖的高效生物学活性。

马蹄，也称荸荠，原产于中国南方，属莎草科多年生浅水草本植物，地下球茎为食，我国有2000多年悠久的种植史。我国是种植和出口马蹄大国，广泛栽种，覆盖广西、江苏、安徽、广东、湖南、湖北、江西、河北等省，种植面积超60万亩，年产量60-80万吨。马蹄及其深加工产品远销海外，国际上约99％的马蹄贸易来自中国。

马蹄不仅营养丰富，每100g新鲜马蹄中约含1.5g蛋白、0.1g脂类、22g糖类、74mg微量元素以及4mg维生素，并且具有很好的药理学作用。《伤寒杂病论》记载，马蹄具有清热解毒、消肿化瘀、生津止渴、润肺化痰等功效。现代医学证实马蹄具有抗肿瘤、抗菌、治疗呼吸道疾病、利尿通便、治疗糖尿病、治疗高血压等药效。研究发现，马蹄的活性物质主要富集于果皮和果肉之间。在马蹄加工过程中，占总质量25％的马蹄皮被废弃，因此，本发明所需原材料十分丰富。我们研究发现，马蹄皮含有丰富的硫酸多糖，但目前未见从马蹄皮中制备该硫酸多糖的文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，以期以马蹄皮为原料制备马蹄皮硫酸多糖。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，包括如下步骤：

(1)新鲜马蹄皮风干，粉碎备用；

(2)取马蹄皮粉末1份(以质量计)，悬于磷酸盐缓冲液PBS中，质量(g)体积(ml)比为1：(20-30)；

(3)超声波处理3-10分钟，在30-60℃条件下搅拌浸泡1-10小时；

(4)过滤后滤液用2-5‰木瓜蛋白酶于40-60℃条件处理80-100分钟；

(5)沸水浴处理5-10分钟，加入去蛋白溶液Sevage溶液，搅拌8-15分钟后静置20-30分钟；

(6)离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为70-80％，静置过夜；

(7)沉淀用70-80％乙醇洗涤后离心；

(8)沉淀用6-8倍量的水溶后，冷冻干燥，获得马蹄皮硫酸多糖；所述步骤(1)中，将马蹄风干粉碎后，过200目筛，制备粉末；所述步骤(2)中，PBS浓度为0.01-0.05mol/L，pH为5.5-6.5；所述步骤(3)中，超声波处理参数为：时间5s，间隔10s，20次；所述步骤(4)中，木瓜蛋白酶终浓度为质量(mg)体积比(ml)，静置环境温度为30-60℃；所述步骤(5)中，Sevage溶液为：氯仿/正丁醇＝4:1(V/V)；所述步骤(6)中，离心速度为5000rpm，向上清液中加入3-5倍体积的无水乙醇，静置环境温度为30-60℃；所述步骤(7)中，离心速度为5000rpm，用70-80％乙醇洗涤三次。