[发明专利]一种提高易起泡液态食品中金黄色葡萄球菌检出限的方法

说明书

本发明提供一种提高易起泡液态食品中金黄色葡萄球菌检出限的方法，加大取样量，使用有效的消泡剂解决样品前处理富集过程中起泡的问题，采用真空滤膜抽滤富集样品中的微生物至微孔滤膜上，提高食品中金黄色葡萄球菌的检出限和灵敏度。采用本方法处理液态食品样品后，液态食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度、检出限和检测准确率都得到了很大提高，检测结果假阴性大大降低。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种提高易起泡液态食品中金黄色葡萄球菌检出限的方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种常见的食源性致病菌，广泛存在自然界中。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属中产生脂溶性黄色色素的革兰氏阳性球菌，直径约0.8-1.0μm，显微条件下呈或散布或凝聚葡萄状，无芽孢、鞭毛，多数无荚膜。

金黄色葡萄球菌极易污染食品，美国疾病控制与预防中心报告显示，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占第2位，仅次于大肠杆菌，占整个细菌性食物中毒的33％。近年来，我国每年由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒已居第4位，严重危害人类身体健康和生命安全。金黄色葡萄球菌造成食物中毒的重要因素是其产生的肠毒素，当金葡菌污染达到一定数量后产生的肠毒素累积会引起食物中毒。因此提高金黄色葡萄球菌的检出限，准确检测食品中的金黄色葡萄球菌数量显得尤为重要。

目前金黄色葡萄球菌成熟的检测方法仍沿用传统的国家标准方法GB 4789.10-2016，取样量为25g(mL)，因此只能检测25g(mL)样品中的部分活菌，检出率较实际样品中的污染低，极易容易出现假阴性结果，危害广大消费者安全，造成食品安全隐患。因此，迫切需要改进和提高食品中金黄色葡萄球菌检测的前处理方法，对样品中的微生物进行高效富集，提高金黄色葡萄球菌的检出限和灵敏度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高易起泡液态食品中金黄色葡萄球菌检出限的方法，加大取样量，使用有效的消泡剂解决样品前处理富集过程中起泡的问题，采用真空滤膜抽滤富集样品中的微生物至微孔滤膜上，提高食品中金黄色葡萄球菌的检出限和灵敏度。采用本方法处理液态食品样品后，液态食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度、检出限和检测准确率都得到了很大提高，检测结果假阴性大大降低。

基于上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种提高易起泡液态食品中金黄色葡萄球菌检出限的方法，包括以下步骤：

1)取500mL易起泡的液态食品样品加入10mL聚二甲基硅氧烷(PMX)消泡，于20℃无菌条件下8000rmp/min离心6min，收集清液；

2)所得上清液用聚醚PES微孔滤膜抽滤，将微生物富集于微孔滤膜上；

3)将微孔滤膜置于Φ55mm 50mL具塞平底玻璃杯中，用10mLHanks洗脱液冲洗浸泡，于微型振荡器震荡2min，使微孔中微生物释放到溶液中得样品浓缩液；此操作要在3min内完成；

4)样品中金黄色葡萄球菌检测

取1mL样品浓缩液与9mL磷酸缓冲液混合得到稀释菌悬液，10倍梯度稀释，每梯度的菌悬液1mL，涂布于Baird-Parker琼脂平板；36℃培养24-48h计数金黄色葡萄球菌典型菌落，计算出的菌落数即为样品中金黄色葡萄球菌的数量。

步骤2)中，聚醚PES微孔滤膜采用Φ50mm 0.45μm聚醚PES微孔滤膜。

步骤4)中，混合时采用漩涡震荡，震荡时间为2min。