[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株及其应用

说明书

本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株及其应用，本发明以高致病性PRRSV TJM‑F92疫苗弱毒株的全长感染性cDNA克隆和类NADC30亚型毒株FJ1402为基础，利用反向遗传技术，构建得到了猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株。该嵌合毒株经试验验证，在Marc‑145细胞上病毒生长速度及病毒滴度低于其原始毒株TJM‑F92，毒力低，对HP‑PRRSV毒株BB0907及类NADC30毒株FJ1402均有较好的免疫保护作用，可对高致病性毒株以及类NADC30毒株感染提供有效的交叉免疫保护，为该病新型广谱疫苗的研制奠定了重要基础。

技术领域

本发明涉及一种新的猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株，还涉及该嵌合毒株株的构建方法及在制备预防猪繁殖与呼吸综合征流行毒株的候选疫苗中的应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的病毒性疫病，其临床症状复杂多样，特征为母猪繁殖障碍或各日龄猪群的呼吸道疾病。1996年该病毒在我国首次被分离到，后逐渐遍及全国。2006年夏秋季节更是暴发高致病性PRRSV(HP-PRRSV)，其主要临床特征为高热、高发病率和死亡率，对养猪业造成了巨大的经济损失。HP-PRRSV毒株相比经典PRRSV会引发仔猪更严重的临床症状，造成更高的发病率和死亡率。PRRSV基因组容易发生变异及重组，给该病防控带来更大的困难。

近年来，国内陆续分离到与美国PRRSV NADC30毒株同源性较高的病毒株，称为类NADC30毒株。分子流行病学调查研究显示，类NADC30毒株在我国已呈现流行态势。美国NADC30毒株对仔猪致病性较弱，但与HP-PRRSV发生基因重组后的类NADC30毒株致病性明显增强。PRRSV为单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科，动脉炎病毒属。该病毒基因组全长约15kb，包含至少11个开放阅读框(ORFs)，其中ORF1a和ORF1b编码非结构蛋白，基因组3’端8个ORFs主要编码病毒的结构蛋白。其中GP2，GP3，GP4和M蛋白形成的寡聚物对诱导中和抗体有一定作用。这些蛋白存在T细胞表位，可以诱导T细胞免疫。GP5由ORF5编码，为病毒囊膜糖蛋白，又是PRRSV主要的宿主保护性抗原，包含诱导中和抗体密切相关的中和表位，GP5氨基酸序列的变异将直接降低PRRS疫苗株的交叉保护率。M蛋白是由ORF6编码的非糖基化膜蛋白，能够介导病毒的吸附和诱导细胞免疫。GP5和M蛋白能够以异源二聚体的形式存在，且这种异源二聚体可以促进GP5蛋白从内质网向高尔基体转运，从而进一步增强GP5蛋白所诱导的免疫反应。N蛋白则是一种高度保守的核衣壳蛋白，具有极强的免疫原性，但其诱导的抗体不具备中和病毒的能力。由于病毒基因组RNA突变、重组等导致毒株呈现变异多样性及遗传多样化趋势，为PRRS防控带来了严峻挑战。当前，PRRSV商品化弱毒疫苗对同源毒株基因较好免疫保护作用，但对异型毒株的交叉保护作用较低。目前，PRRS的商品化疫苗主要有弱毒活疫苗及灭活疫苗，弱毒疫苗比灭活疫苗免疫效力较好，但对不同亚型毒株交叉保护性较差。例如TJM-F92，HuN4-F112，JXA1-R和R98等弱毒疫苗可有效缓解HP-PRRSV造成的临床症状，降低仔猪死亡率，但对类NADC30毒株免疫保护作用有限，因此研究新型广谱疫苗十分必要。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株。该新型嵌合毒株毒力低，具有良好的免疫原性，可对高致病性PRRSV毒株以及PRRSV类NADC30毒株感染提供有效的交叉免疫保护，为该病新型疫苗研制奠定了重要基础。

本发明分离获得了PRRSV类NADC30毒株FJ1402(简称类NADC30毒株FJ1402)与高致病性PRRSV毒株BB0907(简称HP-PRRSV BB0907)，类NADC30毒株FJ1402与HP-PRRSV BB0907致病性相近。