[发明专利]一种冬凌草有效成分的分离方法

说明书

本发明涉及超临界萃取领域，特别是指一种冬凌草有效成分的高效分离方法。称取经浓缩后的冬凌草乙醇提取物置于超临界萃取釜中，充入超临界CO₂流体开始萃取循环，萃取物通过超滤膜后在分离釜中析出，流体流量为5‑20L/h，萃取时间为0.5‑3小时。本发明是在超临界体系中一次完成，不需要其他的设备及装置，处理后的冬凌草提取物颜色由深棕绿色变为橙色，冬凌草甲素的含量由3.24%增加到4.17%，脱色除杂效果明显，有效成分含量升高。

技术领域

本发明涉及超临界萃取领域，特别是指一种冬凌草有效成分的高效分离方法。

背景技术

冬凌草(Rabdosia rebescens ( Hemsl )Hara)系唇形科香茶菜属多年生草本植物的干燥地上部分，主产于我国江西、江苏、安徽、河南太行山南麓济源、焦作、鹤壁等地。医书记载：冬凌草味甘苦，性微寒，具清热解毒、消炎止痛、健胃及抗肿瘤之功效。临床实验证明冬凌草对食管癌、贲门癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌等有一定疗效，对食管上皮增生有显著疗效。药学界专家普遍认为，冬凌草的抗菌作用主要与迷迭香酸有关，而另2种成分——冬凌草甲素与冬凌草乙素则具有抗癌作用，其中冬凌草甲素是冬凌草主要的抗癌活性成分。冬凌草甲素(Oridonin)为四环二萜类化合物，对多种癌细胞具有很强的杀灭抑制作用，这种作用可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡引起的。基于冬凌草的二萜主要成份冬凌草甲素研发的抗白血病用药即将进入临床试验，该化合物将来极有可能成为一种抗肿瘤的临床用药。

对于冬凌草中有效成分的提取，广泛使用的是采用一定浓度的乙醇为溶剂进行回流或渗漉提取，然后将提取液真空薄膜浓缩，浓缩后再进行进一步的分离纯化，得到冬凌草有效成分。由于冬凌草提取液中含有大量色素，严重影响冬凌草有效成分的分离纯化，因此，必须先预处理脱色除杂后，才能进行下一步的有效成分的分离。目前预处理的方法一般有以下几种：

1.大孔吸附树脂吸附法。将冬凌草浓缩液吸附于大孔吸附树脂上，然后用一定浓度的乙醇进行梯度洗脱，洗脱液分别真空浓缩，进一步分离得到有效成分，而色素则被树脂牢固吸附。利用此法虽能达到有效成分初步分离的目的，但此时需用溶剂将色素全部洗脱下来，然后用稀酸、稀碱及水处理使树脂再生。工艺较复杂，操作麻烦，同时存在费时、费工、费溶剂等缺点。

2.硅胶柱层析法。冬凌草乙醇提取物上硅胶柱，用石油醚/丙酮混合溶液洗脱得粗提物，然后用制备型色谱分离得到冬凌草甲素和乙素。此法需要大量洗脱剂，存在费时、费溶剂的不足，同时处理量很小，无法扩大生产。

3. 醇提水沉法。将冬凌草浓缩液加等量水，搅拌后低温放置，也可将色素、油脂类沉淀除去。但由于冬凌草中的有效成分在水中溶解度很小，采用此法在除去色素的同时，冬凌草甲素也会随色素一起被除去，故此法冬凌草甲素收率很低。

4.活性炭回流法。活性炭脱色是除去脂溶性色素常用的方法之一，但由于此法使浓缩液在较高温度下加热，冬凌草甲素受热后破坏较严重。若在常温下浸泡脱色需要很长时间，且脱色效果也不佳，活性炭不易再生，造成浪费和环境污染等问题。

综上所述可以看出，目前冬凌草提取物预处理脱色除杂的方法都不尽如人意。而本发明采用的方法是超临界二氧化碳萃取—膜分离联用，在超临界体系中将冬凌草提取物依次通过微滤膜和超滤膜，将色素等杂质直接从冬凌草提取物中分离脱去，而获得冬凌草有效成分的新技术。