[发明专利]一种叶酸-Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种叶酸‑Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法，是以磷脂、胆固醇、叶酸‑Pluronic F87和姜黄素为原料，采用薄膜分散法结合动态高压微射流技术，经溶解、成膜、水化及动态高压微射流等处理制备的叶酸‑Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体。本方法制备的叶酸‑Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体的平均粒径为81.0±2.9nm，分散系数为0.384±0.061，姜黄素包封率为88.6±1.4％。本发明制备的叶酸‑Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体具有良好的缓释性，在pH7.4条件下，经72h后有82.9％的姜黄素释放出来，且叶酸修饰可增强姜黄素脂质体的细胞毒性。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种叶酸-Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法。

背景技术

姜黄素是一种从姜黄根茎中提出的一种多酚类植物化学物，具有抗肿瘤、改善心血管功能、抗炎、抗病毒、保肝、增强免疫力等生物活性。但是在实际应用过程中，由于姜黄素存在水溶性差、稳定性差、口服生物利用率低、以及体内易被代谢等缺陷，因此限制了其在食品和药物当中的应用。纳米载体如脂质体、纳米粒子、胶囊、胶束、乳液等在药物传递过程中显示出巨大的潜力，通过纳米载体包埋可提高姜黄素的生物利用率和扩大其使用范围。

脂质体是由磷脂、胆固醇等组成的内部为水相、具有类细胞膜结构的双分子层闭合囊泡。可以运载亲水性和亲脂性的物质，在生物医药、食品营养、化妆品等领域有广泛的应用。Pluronic F87嵌段共聚物是一种已经商业化的产品，具有很好的生物相容性，Pluronic F87已经被美国食品与药物管理局(FDA)批准使用。叶酸是人体所需的B族维生素，叶酸(FA)与肿瘤细胞表面过度表达的叶酸受体(Folate Receptor,FR)亲和力高，因此通过叶酸与叶酸受体介导的靶向治疗已成为国内外研究的热点。

本发明以叶酸-Pluronic F87为修饰剂，采用薄膜分散法结合动态高压微射流技术制备叶酸-Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体，该法制备的叶酸-Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体具有良好的缓释性能，且增强了姜黄素的细胞毒性。

发明CN201510671604.3一种叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法也公开了姜黄素纳米脂质体的制备方法，其制备方法与本发明不同，本发明通过采用脱水缩合的方法将叶酸连接在Pluronic F87的一端，效果侧重也与本发明不同，CN201510671604.3主要是侧重于提高修饰后的缓释特性，而本发明的主要是增强其对KB细胞的细胞毒性。

发明内容

本发明目的是为了针对现有姜黄素脂质体水溶性差、稳定性差、口服生物利用率低、以及体内易被代谢等不足，提供一种叶酸-Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法，以提高姜黄素的细胞毒性，评价其缓释性能，促进叶酸-Pluronic F87修饰姜黄素纳米脂质体的开发。本发明的具体工艺步骤如下：

A、叶酸-Pluronic F87的合成：

(1)取叶酸(0.836g,1.9mmol)与1,3－二环己基碳二亚胺(0.367g,1.75mmol)于圆底烧瓶中，加入35mL经干燥的二甲基亚砜进行溶解，于室温下搅拌24h；

(2)将干燥后的F87(14.6g,1.60mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.196g,1.60mmol)加入步骤1的圆底烧瓶中，继续于室温下搅拌48h；

(3)将步骤(2)所得的溶液于5000rpm离心5min,取上清液装入截留分子量为3500Da的透析袋中，在DMSO环境中透析6h，以除去混合液中未反应的FA，继续用超纯水透析48h以除去溶液中的DMSO；