[发明专利]抗人ISG15蛋白抗体基因及其应用

说明书

本发明公开了一种抗人ISG15蛋白抗体基因，还公开了由所述基因编码的抗人ISG15蛋白抗体，以及抗人ISG15蛋白抗体的制备方法，以及所述抗体基因在制备检测人ISG15蛋白试剂中的应用。本申请通过调取抗体可变区基因，克隆后质粒转染得到抗人ISG15蛋白的抗体，能够为后续ISG15抗体相关试剂盒等的研究提供研究基础。

技术领域

本发明属于基因工程和免疫检测技术，特别是涉及一种抗人ISG15蛋白抗体基因及其应用。

背景技术

固有免疫是人体的第一道防线，当机体受到外来病原体入侵时，人体的固有免疫系统可以很快的发挥作用，并可以产生干扰素。ISG15为干扰素刺激蛋白，当机体受到外来病原体侵袭时，其诱导产生的干扰素可以刺激ISG15的产生。 ISG15具有广泛的抗病毒和抗菌活性，在人体抵抗外来病原体入侵的过程中发挥着十分重要的作用。目前市场中ISG15单克隆抗体较少，所以对ISG15抗体的研究很有必要；ISG15抗体不仅可以推动对ISG15的研究，增加人们对ISG15 的认识，还可以增强人们对相关疾病的探索，所以ISG15抗体有着良好的应用前景。

发明内容

发明目的：基于现有技术存在的上述缺陷，本发明提供了一种抗人ISG15蛋白抗体基因及其应用。

技术方案：本发明所述的一种抗人ISG15蛋白的抗体基因，其中，编码重链可变区的基因序列如SEQ ID NO:1所示，编码轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO:2所示。

所述的一种抗人ISG15蛋白的抗体基因，其中，编码重链的基因序列如SEQ ID NO:3所示，编码轻链的基因序列如SEQ ID NO:4所示。

由上述抗体基因编码的抗人ISG15蛋白抗体也在本发明的保护范围内。

进一步的，所述抗人ISG15蛋白抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)杂交瘤细胞的制备；

(2)抗体基因的调取，通过兼并引物调取抗人ISG15蛋白的基因序列；

(3)将调取的抗体可变区基因克隆进入含有信号肽以及恒定区的pcDNA6 载体中；

(4)将构建好的质粒转染293F细胞，培养1-10天后，收集细胞培液上清；

(5)通过Protein A beads纯化获得抗体。

其中，步骤(2)中，所述兼并引物序列如SEQ ID NO:5-8所示；步骤(3) 中设计的引物序列如SEQ ID NO:9-16所示。

含有上述抗体基因的载体、基因工程菌等也在本发明的保护范围内。

所述抗体基因在制备抗人ISG15蛋白抗体中的应用，所述抗体基因在制备检测人ISG15蛋白试剂中的应用也在本发明的保护范围内。

有益效果：本申请通过调取抗体可变区基因，克隆后质粒转染得到抗人ISG15 蛋白的抗体，能够为后续ISG15抗体相关试剂盒等的研究提供研究基础。

附图说明

图1是实施例4的免疫印迹试验结果；图 1A 中是没有用 beads 孵育的实验结果；图 1B 是 beads 孵育后的实验结果 。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本申请作出详细说明。

pcDNA6载体：购自invitrogen；THP-1细胞：购自ATCC：TIB-202；293F 细胞：购自上海纪宁293F(JN-07260)SF:620218898711；小鼠来源：南京大学模式动物研究所。

实施例1杂交瘤细胞的制备

一、小鼠免疫