[发明专利]一种胰腺癌检测试剂及其在胰腺癌检测中的应用

说明书

本发明提供了一种胰腺癌检测试剂，包括PDACS 1：在10mM的NH₄HCO₃中配制成不高于5.0%SDS，pH为7.5‑8.0的NH₄HCO₃溶液；PDACS 2：2~5U/µL的PNGaseF、1~2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照体积1:1:13混合；PDACS 3：混合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；PDACS 4：缓冲液。本发明还提供一种组合物在胰腺癌检测试剂中的应用，所述组合物由NGA2F和NG1A2F组成，所述组合物通过NGA2F/NG1A2F的比值来检测胰腺癌。本发明采用灵敏度高、操作简单、仅需微量样品、重复性高、稳定性好和高通量的检测方法，与现有技术相比，准确度达到86.3%，明显优于现有的检测方法。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种胰腺癌的检测试剂及其在胰腺癌检测中的应用。

背景技术

胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。5年生存率<5%，是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率较高，而治愈率很低。胰腺癌发病呈快速上升趋势。中国国家癌症中心最新统计数据显示，胰腺癌位列中国城市男性恶性肿瘤发病率的第8位，居大城市（北京、上海）人群恶性肿瘤死亡率的第5位。胰腺癌起病隐匿，早期症状不典型，常表现为上腹部不适、腰背部痛、消化不良或腹泻等，易与其他消化系统疾病相混淆，出现症状时大多已属中晚期。

胰腺癌的病理分型是以组织形态结构和细胞生物学特性为基础，不同类型的胰腺癌，其形态结构和生物学行为各异，流行病学和分子机制亦不同，以致于现有的胰腺癌病理分型系统众多。在所有类型的胰腺癌中，胰腺导管腺癌（PDAC）是最为常见的，占85-90%，而患者总体的5年生存率低于5%，这一数字在近50年来都没有改善。其它各类胰腺肿瘤约占胰腺肿瘤的10% - 15%。由于胰腺癌早期转移、生长迅速且位置较深，症状及体征均缺乏典型性，临床上容易漏诊或误诊。目前出现的胰腺癌诊断试剂盒都是检测一些常见的肿瘤标记物，如C19-9、癌胚抗原CEA等，灵敏性及准确性都偏低。单项检测往往有很大的局限性，难以满足快速诊断的要求。所以，本发明专利是应用糖组学方法鉴别诊断胰腺癌及各型胰腺肿瘤，提供一种非侵入性、高灵敏度、高特异度有利于早期诊断胰腺癌的方法。

发明内容

糖基化是指N-寡聚糖能通过上百种酶、转录因子、离子通道和蛋白之间复杂的相互作用而形成的，且参与多种分子过程，如蛋白折叠、细胞粘附、分子转移、信号转导、调节受体活性等；糖蛋白上的N-寡糖链的改变与疾病相关。

通过前期大量研究发现，在胰腺癌患者血清中，N-寡聚糖NGA2F（agalactosylated, core-a-1,6-fucosylated biantennary glycan），NG1A2F（monogalactosylated ,core – a – 1 , 6 - fucosylated biantennary）相对含量与正常血清中相比，发生了明显变化，因此可作为检测胰腺癌的标志物。

针对现有的胰腺癌检测中，血液检测和影像学检测特异性和准确度不高，病理检查有创伤性，抽样误差性，患者依存性差的问题，本发明提供一种胰腺癌的N-寡糖链检测检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种胰腺癌检测试剂，包括PDACS 1：在10mM的NH₄HCO₃中配制成不高于5.0% SDS，pH为7.5-8.0的NH₄HCO₃溶液；PDACS 2：2~5U/µL的PNGaseF、1~2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照体积1:1:13混合；PDACS 3：混合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；PDACS 4：缓冲液。