[发明专利]一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔兹海默症检测中的应用

说明书

本发明提供了一种阿尔兹海默症检测试剂，包括AD1：A与B按照体积1:1混合，其中A：5.0%SDS，pH为8.3，B：2.2U/µL的PNGaseF与3.33%的NP‑40按体积比1:20混合配制；AD2：混合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；AD3：100mM的NH4AC、2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照体积5:1:14混合；AD4：缓冲液。本发明还提供了一种组合物在阿尔兹海默症检测试剂中的应用，所述组合物由NGA2F和NA2组成，所述组合物通过NGA2F/NA2的比值来检测阿尔兹海默症。本发明采用灵敏度高、操作简单、仅需微量样品、重复性高、稳定性好和高通量的检测方法，与现有技术相比，准确度达到87.7%，明显优于现有的检测方法。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔兹海默症检测中的应用。

背景技术

阿尔兹海默症就是俗称的老年痴呆，是一种大脑的退行性改变，主要表现为进行性记忆和认知功能障碍。目前公认的阿尔兹海默症主要的病理改变是脑内β淀粉样斑块的形成和tau蛋白介导的神经纤维缠结。阿兹海默症发病率随年龄显著增高。一般发生在65岁以后，起病不易察觉，发展缓慢，最早期往往是以逐渐加重的健忘开始，常常是阿兹海默病的先兆。主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症状，严重影响社交、职业与生活功能。阿尔茨海默病是老年人的脑部疾病，患者的脑细胞会急速退化，但并不是正常的衰老过程。

根据国际阿兹海默症协会2015年报告，每年新发痴呆病例990万，到2050年，全球患有痴呆的人数将从目前的4600万人增加至1.315亿人，68%的增长将发生在低中收入国家。目前，痴呆是继心血管病、脑血管病和恶性肿瘤之后，老年人健康的“第四大杀手”；是在癌症和心脏病后排名第三的花费最大的疾病。阿兹海默症已成为严重危害老年人群健康和影响我国可持续发展的主要疾病之一，如何对其开展有效的早期诊断和治疗是应对老龄化社会的一个重大挑战。

2018年4月，《2018中国痴呆与认知障碍诊治指南》正式发表，指南的第二部分对阿尔茨海默病的诊断提出了建议：临床AD诊断可依据1984年NINCDS-ADRDA或2011版NIA-AA提出的AD诊断标准进行诊断。有条件进行AD分子影像检查和脑脊液检测时，可依据2011版NIA-AA或2014版IWG-2诊断标准进行AD诊断。应提高对不典型AD的诊断意识。由此可见，阿尔兹海默症的诊断仍然十分复杂，临床上大多使用检测认知功能的问卷测验、脑脊液化验以及结合影像学进行诊断。抽取脑脊液有较大创伤性，目前市场上无通过血液检查，就可以辅助诊断阿尔兹海默症的的试剂。

发明内容

糖蛋白的N-寡聚糖合成是通过上百种酶、转录因子、离子通道和蛋白之间复杂的相互作用而形成。N-寡聚糖参与多种分子过程，如蛋白折叠，细胞粘附，分子迁移，信号转导，调节受体活性等。因此N-寡聚糖的改变与疾病紧密相关。

通过前期大量研究发现，在阿尔兹海默症患者血清中，N-寡聚糖anagalactosylated, core-a-1,6-fucosylated biantennary glycan (NGA2F)，bigalactosylated,biantennary glycan (NA2)相对含量与正常血清中相比，发生了明显变化，因此可作为检测阿尔兹海默症的标志物。

针对现有的阿尔兹海默症检测中，认知功能问卷检测及影像学检测特异性和准确度不高。脑脊液检测创伤较大、尚无其它血液检测及病理检测方法，本发明提供一种应用在阿尔兹海默症检测中的阿尔兹海默症检测试剂。

本发明采用的技术方案如下：

一种阿尔兹海默症检测试剂，包括AD1：A与B按照体积1:1混合，其中A：5.0% SDS，pH为8.3，B：2.2U/µL的PNGaseF与3.33%的NP-40按体积比1:20混合配制；AD2：混合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；AD3：100mM的NH4AC、2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照体积5:1:14混合；AD4：缓冲液。