[发明专利]一种荷花无菌苗走茎快速增殖方法

说明书

本发明公开了一种荷花无菌苗走茎快速增殖方法。本发明包括选荷花叶柄、叶片均为青绿色的无菌苗芽,在无菌条件下接入无菌增殖培养基,然后添加无菌水1‑2cm，封口放入组培室；每天光照时间为14‑16小时，光照强度1500‑2500Lx，控温25‑28℃，培养40‑45天后获得大量走茎苗；所述的增殖培养基以MS作为基本培养基，加入6‑BA 1‑1.5mg/L+IBA 0.5‑1mg/L+GA₃0.05‑0.08mg/L+蔗糖60g/L,琼脂9.5g/L,pH＝5.8。本发明显著提高了产生走茎苗的效率，苗的成活率，并且把污染率、损耗率、枯黄率降至最低。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种荷花无菌苗走茎快速增殖方法。

背景技术

荷花(Nelumbo nucifera Gaertn.)为莲科莲属多年生水生花卉,是中国十大传统名花之一，具有很高的观赏价值、经济价值和独特的文化内涵，深受人们喜爱。

荷花繁殖及保存方法主要采用传统的分藕和大面积缸栽或池植。但是，以常规的方法繁殖不仅繁殖系数较低，用种量大，而且由于病毒病等病害常发造成植株严重减产，品质变劣，这个问题已成为限制荷花种植业发展的主要障碍。而组培的方法可以解决繁殖系数低和脱毒的问题。国内已有不少研究者开始采取组织培养的方法来解决这些问题。浙江省农科院园艺所以荷花的茎尖作为外植体来进行组织培养；武汉市蔬菜科学研究所水生蔬菜研究室在进行试管藕的研究；福建省农业科学院省农业遗传工程重点实验室也在探索莲藕的微繁殖技术。但在前人及我们的实践中发现，荷花无菌苗在不结藕的情况下，即使已生根，出瓶后基本无法成活。因此，必须在组培瓶内诱导出大量的走茎(根状茎)，才能进一步诱导其膨大结藕，保证出瓶后的成活率。

目前，荷花的组织培养技术并不完善，现在常用的技术存在产生不了走茎，增殖效率低，污染率大，成活率也比较低的缺陷。我们采用荷花胚进行组织培养试验，筛选出较为合适的大量产生走茎的培养基，以期获得大量荷花组培苗，提高组培苗的出瓶成活率。

发明内容

本发明的目的是提供一种荷花无菌苗走茎快速增殖的构建方法，以解决现有技术培育过程不易产生走茎，增殖效率低，污染率高，成活率低的问题。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种荷花无菌苗走茎快速增殖方法，选荷花叶柄、叶片均为青绿色的无菌苗芽,在无菌条件下接入无菌增殖培养基,然后添加无菌水1-2cm，封口放入组培室；每天光照时间为14-16小时，光照强度1500-2500Lx，控温25-28℃，培养40-45天后获得大量走茎苗；所述的增殖培养基以MS作为基本培养基，加入6-BA 1-1.5mg/L+IBA 0.5-1mg/L+GA3 0.05-1.0mg/L+蔗糖60g/L,琼脂9.5g/L,pH＝5.8。

所述的增殖培养基优选以MS作为基本培养基，加入6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+GA₃0.05mg/L+蔗糖60g/L,琼脂9.5g/L,pH＝5.8。

所述的增殖培养基优选配制好之后放入120℃高温灭菌锅之中进行高温灭菌，灭菌完成后取出，轻轻晃动培养瓶使培养液均匀，把瓶盖再次拧紧，静置，待凝固后备用。

所述的无菌水优选将纯水放入培养瓶之中，高压灭菌后取出，放冷备用。加无菌水可以减少无菌苗叶柄枯萎的现象。

所述的荷花无菌苗走茎快速增殖方法，优选把筛选好的初代无菌芽及提前灭好的培养基及无菌水放入无菌操作台，紫外灭菌30min，通风15min，用镊子把无菌芽接入培养基，然后添加高温灭菌后的无菌水1-2cm，封口放入组培室。

本发明方法中，在增殖培养时，由于无菌苗芽会有受菌的污染情况，应该把受污染的苗挑选出来扔掉，此种无菌苗增殖培养时污染风险很大，在增殖培养前，将此种无菌苗挑出，挑选出青绿色无污染的初代无菌苗芽进行增殖可以很好的降低污染率。