[发明专利]利用荧光显微镜生成荧光照片的方法

说明书

本发明公开了一种利用荧光显微镜生成荧光照片的方法，其中，在拍摄完利用一个光学通道的光所产生的荧光图像之后，能够重新拍摄利用该光学通道的光所产生的荧光图像并且用重新拍摄的荧光图像替换原荧光图像，而不需重新拍摄已经拍摄完毕的利用其它光学通道的光所产生的荧光图像。因此，减少了样品暴露在光下的时间，避免了样品被漂白并且节约了拍摄时间。

技术领域

本发明涉及光学领域，具体而言，涉及一种利用荧光显微镜生成荧光照片的方法。

背景技术

荧光分为自然荧光和人工荧光两种。

自然荧光(或称一次荧光、自发荧光、自体荧光和原发荧光)指的是某些物质无需经过处理，当受到激发光照射就能产生荧光现象。例如，植物的叶子、茎，动物的一些组织(牙齿、骨质、爪甲、白头发、尿液、血浆及维生素等)，某些结晶体，有机化合物，合成物，油类，蛋白质，腊等都可以产生自然荧光。所以，自然荧光在造纸、纤维、染料、化学药品、食品和油脂等工业方面被用作检查和鉴别。在环保中对大气污染公害的监测中也利用紫外线进行粉尘荧光观测。

人工荧光(或称二次荧光、继发荧光、染色荧光)指的是某些物质必须经过化学处理，例如用荧光染料(即荧光色素)与其结合，才能在激发光下产生荧光。荧光色素是一类能产生明显荧光，并能作为染料使用的有机化合物，它有天然和人工合成两类。人工合成的荧光色素常用的有数十种之多，例如吖啶橙、罗达明等。非荧光试样通过用选择的荧光色素进行染色后，在荧光显微镜下就可从颜色和反差中清晰地分辨试样中不同的细胞组织。染色荧光方法在细胞化学和组织化学中很早就应用了，例如利用盐基黄(Auramine)对结核菌染色。

荧光有很多实际的应用，包括矿物学、宝石学、医学、化学、生物学等。尤其在生命科学领域，广泛应用在分析化学、生物化学、细胞与分析生物学等。荧光标记作为一种非接触式的手段，用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等，是研究的基本工具。近年来在生物学研究中，荧光标记被广泛地用于标定生物分子。

免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。该技术利用针对其抗原的抗体的特异性将荧光染料靶向细胞内的特定生物分子靶标，因此允许通过样品观察靶分子的分布。在实际应用上，往往有多种靶标需要观察，因此需要观察多种荧光标记。

荧光显微镜是光学显微镜的一种，是指使用荧光来产生图像的显微镜。样品被照射特定波长(或波段)的光，入射光被荧光团吸收，导致样品发出更长波长的荧光。通过使用滤片，样品发出的荧光被从强得多的照明光中分离出来，并且在显微镜中成像。

在荧光显微镜的应用中，人们往往希望利用多个光学通道拍摄图像，每个光学通道对应于一种波长的光。例如，在生物荧光中，人们希望使用不同的波长的光激发样品，然后拍摄不同的波长的光在样品上所产生的一系列荧光图像，最后将所有荧光图像合成一个图像以形成荧光照片。

目前的荧光显微镜中，需要按预定的顺序用不同光学通道的光产生样品的荧光图像，然后将所有荧光图像合并成一个图像。但是，该技术方案具有如下缺陷：

在拍摄过程中，如果发现合成的荧光照片或某个光学通道获得的荧光图像质量较低，无法仅重新拍摄该光学通道的光所产生的荧光图像，而是必须按预定的顺序重新拍摄所有的光学通道的光所产生的荧光图像。这会导致样品由于暴露在光下的时间过长而被漂白。另外，也浪费了拍摄时间。

发明内容

本发明的出发点在于，提供一种利用荧光显微镜生成荧光照片的方法，从而解决样品在拍摄过程中暴露在光下时间过长的问题。

本发明的实施例提供了一种利用荧光显微镜生成荧光照片的方法，所述荧光显微镜设置有多个光学通道，每个光学通道对应于一种波长的光，所述方法包括：