[发明专利]评价母乳性黄疸的生物标志物、试剂盒以及方法

说明书

本发明公开了一种评价母乳性黄疸的生物标志物，所述生物标志物为肠道菌群，例如埃希氏菌、罗斯氏菌的一种或多种。本发明还公开了一种评价母乳性黄疸的检测试剂盒以及评价母乳性黄疸的方法，所述检测试剂盒包括粪便基因组样本提取试剂和16S rRNA基因的PCR扩增试剂。本发明通过肠道菌群作为生物标志物，能够容易且可靠地检测母乳性黄疸，为临床上母乳性黄疸的早期诊断提供了可能，从而有利于降低因诊断暂停母乳喂养的风险及因严重母乳性黄疸导致的核黄疸。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用于评价母乳性黄疸的生物标志物、试剂盒以及方法。

背景技术

新生儿期胆红素生成较多、肝脏摄取胆红素能力低下、肠肝循环存在，导致出生后血清胆红素水平呈现动态变化，出生1～2周内常会出现一过性黄疸，其中大部分属于生理性黄疸，但在围生期感染、同族免疫性溶血、母乳喂养、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏等特殊疾病状态下可致病理性黄疸。

与其他病理性黄疸相比，母乳性黄疸无特有的临床表现，且发病机制尚不明确，缺乏诊断黄疸病因的生物学标记物，目前用于母乳性黄疸的诊断主要为排他性诊断，包括(1)纯母乳喂养；(2)黄疸在出生后4～28天内出现并持续不退，血清胆红素以未结合胆红素增高为主；(3)停母乳3天，黄疸明显减轻，胆红素降至原来水平的50％及以上；(4)排除感染、G-6P-D 缺乏、自身免疫性溶血、红细胞增多症、头皮血肿、颅内出血、胆汁淤积、低血糖、甲减、低体温、窒息等其他病理性黄疸原因。过高的胆红素水平可发生胆红素脑病或核黄疸，遗留听力、视力损害以及神经系统损伤；母乳性黄疸由母乳因素引起，常常通过试停母乳观察黄疸消退情况进行诊断，极易导致母乳喂养中断或提前终止。

随着对肠道微生物认识的深入研究，人们对肠道微生物在人体的作用越来越清晰，对肠道微生物与人类的健康疾病的关系也有了更深层次的认识。 16S rRNA高通量测序技术是根据细菌的保守序列设计扩增引物，通过PCR 扩增将所有含有保守序列的微生物片段进行扩增、捕获，再根据细菌的变异序列(即每种细菌所特有的序列)进行测序分析及比对，以确定细菌的种属信息。相对传统的细菌培养或普通PCR分子生物学技术而言，16SrRNA高通量测序具有高准确性、高灵敏度，能获得较为全面的微生物信息。

肠道细菌参与胆红素代谢，其组成与血清胆红素水平关系密切，母乳性黄疸患儿缺乏转化胆红素的肠道菌群可能导致胆红素肠肝循环增加，引起新生儿高胆红素血症。目前对母乳性黄疸发病机制的认识尚不足，临床诊断缺乏实验室诊断指标，不易与其他病因相鉴别而主要依赖排他性诊断，因此，新的可以用来诊断和识别母乳性黄疸的生物学标记物亟待发现。

发明内容

本申请人经研究发现母乳性黄疸患儿肠道菌群结构存在改变，虽然引起母乳性黄疸肠道菌群变化的机制仍不清楚，但肠道菌群结构的改变可以预示母乳性黄疸的发生发展并为母乳性黄疸的诊断提供可靠证据。因此，通过检测可疑母乳性黄疸患者肠道菌群的结构，可以明确该患者是否为母乳性黄疸，而不再单纯依赖排他性诊断，亦能降低因诊断导致母乳喂养暂停的风险。

由于肠道菌群对胆红素代谢的影响是黄疸发生发展的关键环节之一，对肠道菌群结构进行全面、完整的检测对依据肠道菌群实现母乳性黄疸早期诊断十分重要。目前采用的肠道菌群结构分析检测方法主要为16S rRNA高通量测序，可对肠道菌群信息实现较全面的分析，本发明针对现有技术中母乳性黄疸诊断缺乏高敏感性和特异性生物标记物的问题，目的在于提供一组母乳性黄疸的生物标志物，该生物标志物即为埃希氏菌、罗斯氏菌。

本发明的目的之一在于提供一种评价母乳性黄疸的生物标志物，所述生物标志物为肠道菌群。

所述肠道菌群为埃希氏菌、罗斯氏菌、或者为埃希氏菌和罗斯氏菌；若粪便中，所述埃希氏菌的截断值为0.027，和/或，所述罗斯氏菌的截断值为 0.012。若粪便中，所述埃希氏菌的丰度大于截断值0.027，和/或，所述罗斯氏菌的丰度大于截断值0.012，则辅助诊断为母乳性黄疸。