[发明专利]一种邻苯二甲酸酯类增塑剂单链DNA核酸适配体及其筛选与表征方法及电化学传感器

权利要求书

1.一种邻苯二甲酸酯类增塑剂单链DNA核酸适配体，其特征在于，该核酸适配体的单链DNA序列为DBP-1：5'CTTTCTGTCCTTCCGTCACATCCCACGCATTCTCCACAT3'或DBP-2:5'CTTTCTGTCCTTCCGTCACAGGTCCCACGCATTCTCCACAT3'。

2.一种基于如权利要求1所述的核酸适配体的电化学生物传感器。

3.如权利要求2所述的电化学生物传感器，其信号探针为DBP-1-10T-C-Fc或者DBP-1-C-Fc。

4.一种邻苯二甲酸酯类增塑剂单链DNA核酸适配体的筛选与表征的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一：通过化学合成制备在其中一条线性脂肪侧链的末端具有氨基基团的邻苯二甲酸二丁酯的衍生物；步骤二：通过氨基与琼脂糖微球上的环氧乙烷活化基团进行缩合反应将其中一条线性脂肪侧链的末端具有氨基基团的邻苯二甲酸二丁酯的衍生物共价连接到琼脂糖微球上；步骤三：进行基于固相分离的核酸适配体筛选。

5.根据权利要求4所述的的方法，其特征在于，步骤一如下：(1)邻苯二甲酸单丁酯的制备；DCC缩合产物的制备；其中一条线性脂肪侧链的末端具有氨基基团的邻苯二甲酸二丁酯的衍生物的制备。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，(1)邻苯二甲酸单丁酯的制备如下：将8.5g，57mmol邻苯二甲酸酸酐、5毫升正丁醇、7.5毫升无水处理的四氢呋喃及洁净干燥的磁子放入50毫升干燥的圆底烧瓶中，在磁力搅拌下60℃加热回流9小时,有不溶的白色固体生成，放置室温后抽滤，用四氢呋喃洗瓶子后再次抽滤，旋蒸后得白色浆状物质，加入CH₂Cl₂后，有白色沉淀，抽滤旋蒸得到油状液体，加入100毫升去离子水，再用等体积的乙酸乙酯萃取3次，用饱和NaCl萃取有机相1次，最后用无水Na₂SO₄干燥有机相，放置过夜，过滤，旋干得10.986g，硅胶柱分离纯化，旋干后抽真空得2.1g邻苯二甲酸单丁酯，Agilent 1200高效液相色谱分离为单峰，产物纯净；DCC缩合产物的制备如下：邻苯二甲酸单丁酯和5-(N-叔丁氧基氨基)-1-戊醇按1:1.2投料，20ml无水四氢呋喃中加入1.158g邻苯二甲酸单丁酯，磁力搅拌及冰水浴下，加入5.495g二环己基碳二亚胺，10分钟后加入0.217g 4-二甲氨基吡啶，20分钟后加入5-(N-叔丁氧基氨基)-1-戊醇1.723g，溶于5ml的无水四氢呋喃，逐滴加入，在冰水浴搅拌1小时后，撤冰水浴室温反应27小时，将反应液进行抽滤，用无水的四氢呋喃洗涤烧瓶，抽滤，将滤液旋蒸，加入20毫升石油醚洗涤，抽滤，置于冰箱过夜抽滤，用石油醚洗涤烧瓶抽滤，旋蒸，接着过硅胶柱纯化产品，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝8:2(v:v)，旋蒸，纯化后得到约0.5g DCC缩合产物，一维核磁氢谱表征，VNMRS600兆赫，TMS为内标，CDCl ₃为溶剂，证实得到预期的邻苯二甲酸单丁酯；其中一条线性脂肪侧链的末端具有氨基基团的邻苯二甲酸二丁酯的衍生物的制备如下：将0.5g DCC缩合产物，2毫升二氯甲烷和2毫升三氟乙酸加入三颈烧瓶中，在室温下磁力搅拌40分钟，然后将混合物过滤，旋转蒸发，得油状液体，油性液体用乙酸乙酯萃取三次,并用饱和NaHCO₃洗涤一次，用无水硫酸钠干燥，最后，经过过滤，旋转蒸发，得到0.1g其中一条线性脂肪侧链的末端具有氨基基团的邻苯二甲酸二丁酯的衍生物。