[发明专利]一种同时制备生物表面活性剂和乳化剂的发酵培养方法

权利要求书

1.一种同时制备生物表面活性剂和乳化剂的发酵培养方法，其特征在于，在同时含水溶性和非水溶性碳源的培养基中培养Bacillus subtilis菌种，获得发酵液，用于与油井及油污泥中的石油烃形成分散体系；

所述的培养基中水溶性碳源浓度20~40 g/L，非水溶性碳源浓度1~2 %；

所述的水溶性碳源为蔗糖，所述的非水溶性碳源为菜花油、橄榄油、核桃油、花生油、葵花油、米糠油、香油、杏仁油、葡萄籽油、玉米油或大豆油；

Bacillus subtilis菌种为Bacillus subtilis TD7菌种，或Bacillus subtilisCGMCC 1.8715；

所述的方法具体包括以下步骤：

1）种子液培养：取菌种Bacillus subtilis至LB平板上，将平板置于37℃恒温培养箱中活化培养12 h；用接种环从斜面上挑取单菌落至种子液培养基中，于37℃，150rpm/min下摇床培养14 h取出作为种子液备用，种子液培养基组分为20.0g/L 水溶性碳源，1.34g/LNH₄Cl，2.45g/L KH₂PO₄，3.97g/L Na₂HPO₄·12H₂O，0.1g/L MgSO₄，1g/L 酵母粉，0.001g/LCaCl₂；培养基pH为6.7；

2）摇瓶培养：将步骤（1）培养完成的种子液按体积分数1.0%的接种量接入发酵培养基中，于37℃，150 rpm摇床培养3天；

发酵培养基组分：20~40g/L 水溶性碳源，1.34g/L NH₄Cl，2.45g/L KH₂PO₄，3.97g/LNa₂HPO₄·12H₂O，0.1g/L MgSO₄，1g/L 酵母粉，0.001g/L CaCl₂；培养基pH为6.7，以及1~2%非水溶性碳源， pH为6.9。

2.根据权利要求1所述的一种同时制备生物表面活性剂和乳化剂的发酵培养方法，其特征在于，所述的水溶性碳源为蔗糖，在培养基中的浓度为20 g/L。

3.根据权利要求1所述的一种同时制备生物表面活性剂和乳化剂的发酵培养方法，其特征在于，所述的非水溶性碳源为大豆油。

4.根据权利要求1所述的一种同时制备生物表面活性剂和乳化剂的发酵培养方法，其特征在于，所述的培养基中培养温度37℃，培养基初始pH为6.7-6.9，培养时间3天。