[发明专利]观察细胞迁移极化分子分布的方法

说明书

本发明提出了一种观察细胞迁移极化分子分布的方法，细胞可在特定趋化物的作用下定向运动，可用于对不同细胞在特定趋化物作用下的趋化运动观察，并基于此对细胞迁移极化中的特定子分布进行观察；另外，本发明中细胞迁移过程排除自身重力因素影响，可对细胞迁移极化过程及相关极化分子进行观察。

技术领域：本发明涉及一种细胞实验用装置，特别是一种观察细胞迁移极化分子分布的方法。

背景技术：细胞迁移是细胞在接收到迁移信号，通过一系列的粘附去粘附的过程，在基质表面产生的细胞位移，是细胞运动的重要现象。细胞迁移过程中涉及到细胞骨架和其结合蛋白及细胞外基质蛋白的变化，在迁移信号浓度及细胞外基质密度的刺激下，细胞内外的信号分子和细胞骨架调节分子产生不对称的分布和/或激活，导致细胞骨架的形态、分布和细胞器的定位在即将发生迁移的方向上表现出前后不对称型，这一过程被称作迁移细胞的极性化。在极化过程中涉及多个信号通路和分子，而不同信号通路及分子的相互作用保证了细胞极化及迁移过程的正确完成。在细胞迁移极化过程中，这些细胞分子分布状态的改变，在细胞迁移过程中发挥了重要的作用。

目前在细胞实验中，用于细胞运动迁移观察和测定的方法如细胞伤口愈合、Boyden小室、Transwell小室等模型已在细胞迁移研究中取得了显著的成果，然而，对于细胞运动迁移极化的观察，这些模型还存在其局限性。细胞伤口愈合类细胞迁移运动，现有的技术中通常采用物理划痕方式，对于细胞的迁移运动缺乏方向性，多为随机运动，不便于细胞极化观察研究；Boyden小室、Transwell小室则为细胞在趋化物作用下由上室穿膜向下室的迁移，结果受自身重力因素影响，缺乏细胞迁移极化过程。以上方法均不能对细胞迁移极化过程进行观察，并基于此进一步对分子分布进行研究。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种观察细胞迁移极化过程中分子分布的装置和方法。

本发明的一个目的是提供一种观察细胞迁移极化的装置，

如图1至2所示，其特征为在圆形培养皿2中装有3ml琼脂糖1，在琼脂糖中有两个圆孔3，4，即为细胞用孔和趋化物用孔，在连接圆孔3，4之间的区域为观察细胞迁移的区域5。

所述趋化物为一种可以诱导细胞由低浓度趋化物区域向高浓度趋化物区域迁移的物质，包括但不限于补体类趋化物、CC类趋化物、CXC类趋化物、CX3C类趋化物、甲酰化肽类趋化物（如fMLP）等。

所述细胞，包括但不限于中性粒细胞，巨噬细胞，单核细胞，淋巴细胞，内皮细胞，网柄菌等。

所述细胞用孔、趋化物用孔为直径为3.5mm、深为3.2mm的圆孔，圆孔间距离为2.4mm。

本发明的另一目的提供一种观察细胞迁移极化过程中分子分布的装置的制备方法，其特征在于：

（1）玻璃组织培养片的准备：利用100%甲醇清洗玻片并晾干，将干燥后的玻片放置于培养皿中，加入10%的胎牛血清（FBS）并于室温静置30分钟；去除FBS，使用PBS洗涤两遍。

（2）配置A液：在50ml离心管内依次加入RPMI1640培养液18ml、胎牛血清2ml、10*HBSS（含钙镁）2ml、无菌双蒸水8ml，充分混匀，置于68水浴箱中，水浴35分钟。

（3）配置B液：50ml离心管称取0.48g低熔点超纯去热源琼脂糖，加入10ml无菌双蒸水，涡旋振荡器上剧烈震荡15秒，充分混匀。

（4）配置A, B混合液：使用微波炉加热至B液沸腾，将A液移至B液中，充分混匀A、B液。

（5）制作琼脂糖凝胶：吸取AB混合液3ml加入至培养皿（含上述处理过的玻片）中，室温冷却1小时，再放置于4冰箱中冷却1小时，即为琼脂糖凝胶。