[发明专利]一种性能稳定的黑米花青素单体及分子修饰制备方法

权利要求书

1.一种性能稳定的黑米花青素单体的制备方法，其特征在于：所述黑米花青素单体为酰化矢车菊素-3-葡萄糖苷，由矢车菊素-3-葡萄糖苷经过p-香豆酸修饰制得，酰化矢车菊素-3-葡萄糖苷为棕褐色粉末状，其纯度≥95%；

具体制备操作步骤如下：

利用4A分子筛将反应介质干燥，将酰基供体和矢车菊素-3-葡萄糖苷（C3G）粉末按照10:1的摩尔比加入干燥后的反应介质中，反应物与反应介质的固液比为1:1，连续搅拌至完全溶解，加入Novozym 435脂肪酶，使Novozym 435脂肪酶在溶液中浓度为5 mg/mL，最后加入浓度100 mg/mL的4A分子筛吸收反应过程中产生的水，在30℃下，反应100h，得到矢车菊素-3-葡萄糖苷反应液；

所述反应介质为叔戊醇或乙腈或正丁醇中的一种；

所述酰基供体为p-香豆酸；

所述矢车菊素-3-葡萄糖苷（C3G）粉末的纯度大于99.0%；

通过制备型液相色谱，利用乙腈洗脱，得到只含有矢车菊素-3-葡萄糖苷修饰产物的分离液；

将所述分离液预冷冻，真空冷冻干燥机中，在真空度0.05～0.1Mpa、冷冻干燥温度-20～-60 ℃条件下，干燥至水分含量≤5%，得到棕褐色粉末状的酰化矢车菊素-3-葡萄糖苷；

制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的具体操作步骤如下：

（1）清洗去杂

除去黑米中肉眼可见的杂质和霉变的颗粒；

（2）粉碎浸提

用去离子水清洗除杂后的黑米，粉碎，过50～100目筛；按照质量体积比1 Kg:10～20 L取黑米和水，加入浓度1～3%的柠檬酸溶液调节pH为2.5～6.0，在20～55℃下，浸提2～5 h，得到黑米花青素浸提液；

（3）离心分离

离心处理黑米花青素浸提液，使固液分离，取上清液，得到黑米花青素水提液；

具体操作是：通过碟片式离心机，在5000～10000 r/min下，除去黑米花青素浸提液中的淀粉、蛋白质、多糖等杂质；

（4）树脂纯化

利用AB-8树脂纯化黑米花青素水提液，乙醇洗脱，收集黑米花青素乙醇洗脱液；

具体操作是：先用3～9倍柱体积的去离子水洗脱柱子，再按照AB-8树脂体积的1～4倍进行上样，最后用浓度为65～95%的乙醇洗脱，洗脱体积2～5倍柱体积；

（5）纳滤浓缩

利用分子量200～400 Da的纳滤膜浓缩黑米花青素乙醇洗脱液，收集截留液，得到黑米花青素浓缩液；

纳滤浓缩条件：压力0.4～0.8 MPa、温度20～45℃条件下冷冻干燥；

（6）制备黑米花青素粗提物

将黑米花青素浓缩液真空冷冻干燥至水分含量≤5%，获得粉末状的黑米花青素粗提物；

真空干燥操作如下：在温度0～-2 ℃条件下，将黑米花青素浓缩液预冷冻0.5～1h；在真空冷冻干燥机中，真空度0.05～0.1Mpa、温度-20～-60℃条件下；

（7）矢车菊素-3-葡萄糖苷提取纯化

按体积比1：3-5，将黑米花青素粗提物用酸液复溶，通过制备型液相色谱，利用甲醇和乙腈洗脱，得到只含有矢车菊素-3-葡萄糖苷的分离液；

所述酸液为浓度100%的p-香豆酸；

（8）真空冷冻干燥

将矢车菊素-3-葡萄糖苷的分离液真空冷冻干燥至水分含量≤5%，即得矢车菊素-3-葡萄糖苷（C3G）粉末；

具体操作是：在温度0～-2 ℃条件下，将矢车菊素-3-葡萄糖苷分离液预冷冻0.5～1h；在真空冷冻干燥机中，真空度0.05～0.1Mpa、温度-20～-60℃条件下，干燥至水分含量≤5%，获得粉末状的矢车菊素-3-葡萄糖苷。