[发明专利]一种抗His标签的重链抗体及其应用

说明书

本发明涉及分子免疫学领域，具体提供了一种抗His标签的重链抗体，其3个互补决定区CDR区和4个框架区FR区的序列分别如下：SEQ ID NO:1所示的CDR1、SEQ ID NO:2所示的CDR2、SEQ ID NO:3所示的CDR3、SEQ ID NO:4所示的FR1，SEQ ID NO:5所示的FR2、SEQ ID NO:6所示的FR3、SEQ ID NO:7所示的FR4。本发明还提供了抗His标签的重链抗体的制备方法和应用。本发明提供的重链抗体与带His标签蛋白的亲和力达到7.11×10^‑8M，且具有分子量小、易于表达、成本较低、稳定性好等优点。

技术领域

本发明属于分子免疫学领域，具体涉及噬菌体展示文库和纳米抗体重组表达技术，特别涉及一种特异性识别His标签的重链抗体及其应用。

背景技术

重链抗体(heavy chain antibody，HcAb)发现于骆驼和鲨鱼类动物体内，是一种天然缺失轻链，只有重链组成的抗体。克隆其可变区可以得到只有重链可变区组成的单域抗体，称为VHH(Variable domain of heavy chain of heavy chain antibody)，也称为纳米抗体(nanobody)，它是最小的功能性抗原结合片段。与普通抗体不同，纳米抗体是一条含有大约110个氨基酸的肽链，其分子量约为普通抗体的1/10，纳米抗体与普通抗体及重组单链抗体(single chain fragment variable，scFv)相比，具有分子小、稳定性好、可溶性好、易于表达、生产成本低等优点，在免疫实验、诊断与治疗中，具有广阔的应用前景。

His标签(His-tag)也称为多组氨酸标签或hexa组氨酸标签，是一种位于目标蛋白的C端或N端上由至少6个组氨酸组成的短肽，His标签可以在特定的缓冲液条件下结合到几种固定的离子上(比如镍、钴和铜)，专门设计用于重组蛋白质的亲和层析纯化。His标签可作为亲和标签纯化蛋白的基本原理是固相化金属亲和层析，组氨酸作为电子供体与介质上的金属离子之间发生相互作用，使二者相结合，从而达到容易检测和纯化蛋白的目的。

与其他标签相比，His标签具有相对小的分子量、低免疫原性、亲水性、在去污剂和其他添加剂存在的情况下易变性，还具有工艺成熟、操作简单和可大规模生产使用等优势，是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。

对带有His标签的蛋白质进行检测和纯化时，无需针对目标蛋白质设计特异性的抗体或探针，只需使用抗His标签的抗体即可实现对其的检测，因此，开发抗His标签的抗体对于重组蛋白质的检测、纯化等研究具有重要意义。

目前，已有针对His标签的单克隆抗体或多克隆抗体，但单克隆抗体的研发和生产过程较为繁琐和复杂，多克隆抗体的特异性不高且不稳定，相比之下重链抗体有稳定性高、特异性高、分子量小和可大规模生产等优点，有广阔的应用前景。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种抗His标签的重链抗体及应用，可用于检测、纯化和富集带有His标签的蛋白质。

为此，本发明提供了一种抗His标签的重链抗体，其可变区具有以下互补决定区(Complementarity determining region，CDR)：SEQ ID NO:1所示的CDR1、SEQ ID NO:2所示的CDR2、SEQ ID NO:3所示的CDR3。

进一步，本发明所述的重链抗体，其可变区具有以下框架区(Framework region，FR)：SEQ ID NO:4所示的FR1、SEQ ID NO:5所示的FR2、SEQ ID NO:6所示的FR3、SEQ ID NO:7所示的FR4。

进一步，本发明所述的重链抗体，可选的具有Fc段或缺失Fc段，优选地，本发明所述重链抗体缺失Fc段，形成单域重链抗体或纳米抗体。

进一步，本发明所述的重链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。