[发明专利]抗猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白单克隆抗体及其制备与应用

说明书

本发明公开一种抗猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白单克隆抗体及其制备与应用，主要涉及生物技术领域，该单克隆抗体主要由杂交瘤细胞株1E4分泌，利用原核表达纯化的猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端267个氨基酸为包被抗原，针对该区域的亲和层析纯化的单克隆抗体mAb‑1E4为阻断抗体，通过HRP标记的特异性单克隆抗体，使其能够通过HRP的底物TMB或DAB直接检测到该单克隆抗体，并应用于制备检测猪戊型肝炎病毒的药物中。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种抗猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白单克隆抗体及其制备与应用。

背景技术

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)属戊型肝炎病毒科戊型肝炎病毒属，是通过消化道传播的无包膜单股正链RNA病毒。戊型肝炎虽然是自限性疾病，但其病死率高于甲型与乙型肝炎，在孕妇中甚至可达20％-30％。

哺乳动物HEV主要分为4个基因型，但仅有一个血清型。其中基因3型和4型HEV为人畜共患病毒，猪和野鹿是其主要的自然储存宿主。目前已有关于人误食了HEV感染的猪和野鹿食品而感染暴发戊型肝炎病例的报道。除了猪以外，其他已知的动物源宿主还包括禽类、大鼠、兔、猫鼬、山羊，潜在的动物宿主包括狗、猫、猴等。

猪HEV不稳定易降解，难以从载毒标本中分离，而迄今为止仍没有有效的细胞培养模型。因此，对该病毒感染的诊断主要是通过病毒RNA的核酸检测和血清中抗病毒抗体的检测。目前，识别猪HEV衣壳蛋白的抗体报道较少。仅有少数几株单抗，其识别构象表位，主要应用于病毒感染宿主细胞后病毒的检测，并发现具有一定的中和效应。但是上述单抗是应用人HEV衣壳蛋白作为免疫原制备的，其对猪HEV衣壳蛋白的亲和力仍有待深入的研究。

目前对于猪血清中HEV抗体的检测多用间接ELISA，其要求高纯度的包被抗原并极易产生非特异性结果。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白的单克隆抗体制备及应用方法，利用阻断ELISA检测猪血清中抗HEV抗体，从而提高对猪血清中抗HEV抗体检测的特异性和灵敏性。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种猪戊型肝炎病毒中国山东分离株(Hepatitis E virus,HEV,CHN-SD-sHEV,GenBank number KF176351)衣壳蛋白，所述蛋白由猪戊型肝炎病毒中国山东分离株的ORF2蛋白C端267个氨基酸构成，其氨基酸序列(QLFYSRPVVSANGEPTVKLYTSVENAQQDKGIAIPHDIDLGESRVVIQDYDNQ HEQDRPTPSPAPSRPFSVLRANDVLWLSLTAAEYDQTTYGSSTNPMYVSGTVTFVNVATGAQGVSRSLDWSKVTLDGR PLTTIQQYSKTFYVLPLRGKLSFWEAGTTKAGYPYNYNTTASDQILIENAAGHRVCISTYTTNLGSGPVSIAAVGVLA PHTALAVLEDTVDYPARAHTFDDFCPECRALGLQGCAFQSTVAELQRLKMKVGKTREY.)与SEQ ID NO.1相同。

本发明还提供一株分泌抗猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为1E4，微生物保藏号为：CCTCC NO:C2018250；保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址湖北武汉，武汉大学。

作为本发明的另一方面，本发明还提供了一种杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，识别猪HEV ORF2蛋白序列上第625至628个氨基酸(⁶²⁵EPTV⁶²⁸)命名为1E4。

优选的，对所述单克隆抗体进行辣根过氧化物酶的标记，命名为HRP-1E4。