[发明专利]一种用于系统性红斑狼疮标志物检测的蛋白芯片及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于系统性红斑狼疮标志物检测的蛋白芯片，所述蛋白芯片的制备方法包括如下步骤：（1）黑玻片预处理；（2）抗原溶液点样；（3）封闭工艺；制得所述蛋白芯片。本发明蛋白芯片用于检测系统性红斑狼疮标志物，应用本公司独创的蛋白芯片技术实现联合检测可以有效地提高检测效率，降低检测成本；本发明人开发了同时包含有抗dsDNA抗体、抗Histone抗体、抗P0抗体、抗Sm抗体、抗Nucleosome抗体、抗Aca抗体、抗β2‑GP1抗体7个指标的蛋白芯片诊断试剂盒，具有快速，高效，低成本等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于检测系统性红斑狼疮标志物的蛋白芯片及其制备方法。

背景技术

自身免疫性疾病是免疫系统对自身机体的成份发生免疫反应，造成损害而引发的疾病。正常情况下，免疫系统只对侵入机体的外来物，如细菌、病毒、寄生虫以及移植物等产生反应，消灭或排斥这些异物。在某些因素影响下，机体的组织成份或免疫系统本身出现了某些异常，致使免疫系统误将自身成份当成外来物来攻击。这时候免疫系统会产生针对机体自身一些成份的抗体及活性淋巴细胞，损害破坏自身组织脏器，导致疾病。如果不及时有效的加以控制，其后果十分严重：免疫系统的攻击会影响每个人体器官，且通常会终身对其进行攻击；有时还可能同时对身体众多部位造成损伤。早期诊断对管理自免来说非常重要，在早期阶段发现可避免或延迟目标器官或组织发生无法补救的损伤。系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus，SLE)是一种累及多系统、多脏器，临床表现复杂多样，病程迁延反复的自身免疫病。SLE患者血清中可存在各种自身抗体，对疾病的发生发展、临床诊断与治疗、病程转归与预后均发挥着至关重要的作用。现将SLE相关的主要自身抗体临床意义归纳如下：

(1)抗β2-GP1抗体

抗磷脂或者抗磷脂-蛋白复合物(aPL)抗体与抗磷脂综合征(APS)相关。APS包括多种自身免疫性疾病，最为重要的有：静脉和动脉血栓形成、血小板减少症、习惯性流产、心肌病、心脏病、大脑和肾脏梗塞、肺高压。目前APS有2类：原发性和继发性的APS。原发性APS(PAPS)的特征为血栓并发症和出现抗磷脂或者磷脂蛋白复合物抗体。继发性APS(SAPS)的特征为患者除具有PAPS的临床症状外，还患有其它自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、硬皮病)。抗磷脂综合征患者可出现多种抗体，其中具有诊断价值的是抗Aca和β2-GP1抗体。在1961年首次确定了β2-GP1(β2-糖蛋白1或者载脂蛋白H)为一血浆蛋白，并于1984年确定其分子生物学特性，其功能是作为抗Aca抗体和Aca结合的辅助因子。APS患者抗β2-GP1-IgG和/或IgM抗体的阳性发生率为30-60％，但在无症状患者中也可出现相同的抗体。抗体浓度和静脉血栓密切相关，而IgM抗体和动脉血栓密切相关。未发现APS相关性流产和β2-GP1抗体滴度相关。检测APS患者血清中抗β2-GP1抗体可显著提高血栓并发症预测率，因而具有很高的诊断价值。抗β2-GP1抗体仅出现在自身免疫性疾病中，而抗Aca抗体可出现在APS以及某些感染性疾病中(梅毒、疏螺旋体病、AIDS、肝炎、肺结核)。在进行广泛的检测过程中，抗β2-GP1抗体可作为自身免疫性血栓的标志物，也为区分自身免疫性疾病和感染性疾病提供血清学的证据；抗Aca抗体不具有相同的功能。抗β2-GP1抗体通常和抗Aca抗体同时出现，且两种抗体的滴度有很好的相关性。不同研究结果显示：抗β2-GP1抗体对于APS的特异性可高达98％，而抗Aca抗体的特异性仅为75％。但是，抗β2-GP1的灵敏度为54％，低于抗Aca抗体的灵敏度。此外，系统性红斑狼疮患者血栓严重程度和抗β2-GP1抗体滴度相关。

(2)抗Aca抗体