[发明专利]一种用于原发性胆汁肝硬化标志物检测的蛋白芯片及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于检测原发性胆汁肝硬化标志物的蛋白芯片，所述蛋白芯片的制备方法包括如下步骤：（1）黑玻片预处理；（2）抗原溶液点样；（3）封闭工艺；制得所述蛋白芯片。本发明蛋白芯片用于检测原发性胆汁肝硬化标志物，应用本公司独创的蛋白芯片技术实现联合检测可以有效地提高检测效率，降低检测成本；本发明人开发了同时检测抗AMA‑M2抗体、抗AMA‑M2‑3E抗体、抗GP210抗体和抗SP100抗体4个指标的蛋白芯片诊断试剂盒，具有快速，高效，低成本等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于检测原发性胆汁肝硬化标 志物的蛋白芯片及其制备方法。

背景技术

自身免疫性疾病是免疫系统对自身机体的成份发生免疫反应，造成损害而 引发疾病。正常情况下，免疫系统只对侵入机体的外来物，如细菌、病毒、寄 生虫以及移植物等产生反应，消灭或排斥这些异物。在某些因素影响下，机体 的组织成份或免疫系统本身出现了某些异常，致使免疫系统误将自身成份当成 外来物来攻击。这时候免疫系统会产生针对机体自身一些成份的抗体及活性淋 巴细胞，损害破坏自身组织脏器，导致疾病。如果不及时有效的加以控制，其 后果十分严重：免疫系统的攻击会影响每个人体器官，且通常会终身对其进行 攻击；有时还可能同时对身体众多部位造成损伤。早期诊断对管理自免来说非常 重要，在早期阶段发现可避免或延迟目标器官或组织发生无法补救的损伤。原 发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种慢性的胆汁淤积性肝脏疾病，其特征为肝内胆 小管阻塞和血清中出现高滴度的抗线粒体抗体。该病病因不清，但现有的证据 表明与自身免疫有关。在英国的东部和北部地区，PBC的发病率为140例/10万。 在欧洲，PBC是进行肝移植最常见的原因。PBC多见于中年女性(90％)，发病 年龄在30-65岁之间。在PBC患者血清中可检出多种自身抗体，实验室检查除 碱性磷酸酶(ALP)、γ谷氨酸转肽酶(GGT)等明显升高及抗线粒体亚型丙酮 酸脱氢酶复合物(抗AMA-M2抗体)阳性外，还有抗AMA-M2-3E抗体、抗核 包膜蛋白(GP210)抗体、抗多核点(SP100)抗体等自身抗体阳性。能够迅速 准确地测定出这些抗体的浓度，对原发性胆汁肝硬化的临床诊断具有重要的意 义。

(1)抗AMA-M2抗体

抗线粒体抗体(AMA)是一种无器官特异性也无种属特异性的自身抗体， 也见于其他自身免疫性疾病患者。线粒体抗原位于真核细胞线粒体膜内，抗原 成分为2一氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原。AMA靶抗原分为9 型(M1～M9)。M2是原发性胆汁性肝硬化患者血清中与AMA反应的主要成分。 原发性胆汁性肝硬化症敏感、特异性实验，高滴度的AMA-M2在原发性胆汁性 肝硬化中阳性率>90％。常用作原发性胆汁性肝硬化症的重要实验室诊断指标， 但AMA与PBC的病期、疾病严重程度、治疗效果均无相关性。除PBC外，抗 线粒体M2型抗体也见于慢性活动性肝炎(CAH)、HBsAg阴性的肝病。由于线 粒体抗原成分复杂，对很多抗原的性质尚不了解，而原发性胆汁性肝硬化患者 几乎都出现高效价抗AMA-M2。

(2)抗AMA-M2-3E抗体

AMA-M2-3E抗原是天然AMA-M2抗原(纯化的抗原以丙酮酸脱氢酶E2 亚基为主)和重组蛋白BPO【2-酮酸脱氢酶E2亚基(BCOADH-E2)、丙酮酸脱 氢酶E2亚基(PDH-E2)和2-酮戊二酸脱氢酶E2亚基(OGDH-E2)的重组融 合蛋白】联合抗原检测AMA M2，灵敏度增高。

(3)抗GP210抗体