[发明专利]一种用于牛奶中兽药残留检测的蛋白芯片及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于测定牛奶六种兽药残留浓度的蛋白芯片，所述蛋白芯片的制备方法包括如下步骤：（1）黑玻片预处理；（2）抗原溶液点样；（3）封闭工艺；制得所述蛋白芯片。本发明蛋白芯片用于检测牛奶中兽药残留，应用本公司独创的蛋白芯片技术实现联合检测可以有效地提高检测效率，降低检测成本；本发明人开发了同时包含有MA、CAP、PCN、SAS、GM和TC六个指标的蛋白芯片诊断试剂盒，具有快速，高效，低成本等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于检测兽药残留的蛋白芯片及其制备方法。

背景技术

兽药残留是指用药后蓄积或存留于畜禽体内或产品中原型药物或其代谢产物。兽药的正确、合理的使用给养殖业带来了高效益，但总有部分人一味追求经济利益，在畜禽产业各个环节中非法使用、滥用、违规添加、注入兽药或有害物质。兽药的残留及有害物质严重影响动物性食品安全、畜牧业的可持续发展，更严重的是直接危害人体健康和生命安全，对人类健康危害极大。因此，必须对动物性食品进行兽药残留含量和违禁药物及有害物质的检测，防止问题畜产品流入市场各环节，保证人们的“餐桌安全”。

六个兽药残留检测的指标分别为：MA、CAP、PCN、SAS、GM、TC。

MA(三聚氰胺)又被人称为“蛋白精”属于化工原料，在牛奶和奶粉添加三聚氰胺，可以冒充蛋白质，提高牛奶中蛋白质的含量指标。三聚氰胺的遗传毒性、亚慢性毒性、慢性毒性是致命的，长期摄入会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，三聚氰胺在2B类致癌物清单中。

CAP(氯霉素)可用于细菌核糖核蛋白体的50s亚基，阻扰蛋白质的合成，对革兰氏阳性、阴性菌均有抑制作用，特别对伤寒杆菌、流感杆菌、副流感杆菌和百日咳杆菌的作用强于其他抗生素。氯霉素会抑制骨髓造血机能，造成有粒细胞及血小板减少、再生障碍性贫血，久用还可致视神经炎、共济失调及二重感染。

PCN(青霉素)是抗菌素的一种，能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素。青霉素毒性低，但较容易发生过敏反应，如：皮疹、哮喘、药物热、严重的可致过敏性性休克而引起死亡。长期使用含青霉素的牛奶，还可出现神经症状，如：反射亢进、知觉障碍、抽搐、昏睡等。

SAS(磺胺药)是一类具有抑菌活性的化学合成药，为对氨基苯磺酰胺的衍生物。本专利中提及的SAS检测主要针对是磺胺十七项的检测。一旦长时间摄入磺胺类的牛奶，造成体内细菌对磺胺药较易产生抗药性，同时当人体内蓄积到一定程度时，会有严重的毒副作用，会破坏人的正常免疫机能、造血系统和泌尿系统，甚至还可抑制骨髓的造血功能，影响中枢神经系统。

GM(庆大霉素)是一种氨基糖苷类药，主要作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质的合成，并破坏细菌细胞膜的完整性。庆大霉素在奶牛上主要是用于治疗乳房炎、子宫内膜炎等。会引起眩晕，耳蜗神经损害表现为听力减退，耳聋；出现蛋白尿、血尿，严重可致肾衰竭；引起骨骼肌收缩、呼吸困难；引起皮疹、药热，还可以引起过敏性休克。

TC(四环素)在奶牛上主要用于治疗乳房炎、子宫内膜，由支原体、衣原体等所致的感染。长期使用含四环素的牛奶会造成消化道反应、肝损害、肾损害、对牙齿和骨骼的发育造成影响、对局部具有一定的刺激作用、过敏反应、导致肠道菌群失调等。

目前这六个指标已经被企业、检测机构、政府执法部门等广泛应用检测。但是目前采取的主流方法是免疫单指标的测定方法(例如ELISA和胶体金等)。虽然能够测定这六个指标，但是存在检测速度慢，检测成本高等缺点。而且六个指标分别检测存在着操作不便，出错概率大等现实问题。而作为微量成分检测最权威的HPLC(液相色谱)法虽然结果准确可靠，但成本极高，设备昂贵，无法大规模采用。牛奶中是否含有抗生素、能否安全食用是大众急切想知道的问题，为了加快检测的速度，不少企业、检测机构、政府执法部门不得不花费更多的人力、物力、时间，分别用于检测MA、CAP、PCN、SAS、GM、TC，造成了较大的浪费。