[发明专利]一种谷瘟病菌产孢培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种谷瘟病菌产孢培养基及其制备方法，该培养基原料包括生苦荞/麦麸、琼脂和水。该培养基制备方法包括以下步骤：将生苦荞/麦麸加水煮沸，过滤，在滤液中加入琼脂加热融化后加水定容，高温高压灭菌备用；接种前，加热融化培养基，冷却，未凝固前倒入培养皿中。本发明所述培养基配方组分易得、简单合理，培养基配制方法简便、易操作，培养过程不易污染、省时省力。

技术领域

本发明涉及植物病原真菌技术领域，尤其涉及一种谷瘟病菌产孢培养基及其制备方法。

背景技术

谷瘟病是严重危害谷子生产的重要病害，进行谷子抗谷瘟病鉴定，筛选抗性材料是培育谷子良种及保证谷子安全生产的前提。但制约谷子抗谷瘟病工作顺利进行的主要因素则是含有大量谷瘟菌分生孢子的接种菌液的制备，能否随时获得大量孢子来配制菌液供田间大量鉴定使用，是制约抗性鉴定工作开展的瓶颈，也是谷子研究工作者急需解决的问题。

谷瘟病病原为灰梨孢菌，寄主植物为谷子、狗尾草。虽然该菌目前的拉丁名与稻瘟菌相同，但二者在培养特性、侵染能力上有很大差异。谷瘟菌不侵染水稻，稻瘟菌也不侵染谷子。相对于稻瘟菌来说从事谷瘟菌研究的单位及科研人员很少，谷瘟菌产孢培养基的研究也多集中在上世纪，目前通常采用高梁粒培养分生孢子。虽然稻瘟菌产孢培养基有较多报道，除高粱外，还有稻节、大麦或小麦种粒等组织培养法，以及燕麦片培养基、米糠培养基、粗面粉培养基、玉米粉培养基、酵母淀粉培养基等。但这些产孢方法操作存在过程繁琐、培养时间长、产孢效果不理想或培养过程中容易污染杂菌等缺点，并且在培养谷瘟菌过程中表现尤其明显。例如高粱粒组织培养法，需要先将筛选籽粒大小相近的高粱粒煮成特定状态(软但不开裂)后再接入已在PDA培养基中培养2-3周、产生较大量可供接种的谷瘟病菌菌丝体。期间高粱粒覆盖纱布后无法保持无菌状态并需持续保持相对稳定的湿度，操作繁琐、耗时长，培养条件不好掌握，且极易污染黄曲霉、黑曲霉、青霉等空气中常见的杂菌，影响后续试验进度。而上述稻瘟菌常用固体培养基虽然可降低污染几率，但多不适用于谷瘟菌分生孢子培养，谷瘟菌在以上固体培养基上多生长缓慢、产孢量低，不能满足后期谷子抗谷瘟病鉴定工作所需。

发明内容

本发明的目的是提供一种谷瘟病菌产孢培养基及其制备方法，解决谷瘟病菌产孢的问题。

为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

一种谷瘟病菌的产孢培养基，根据重量份的原料包括：生苦荞/麦麸40～60份，琼脂12～18份，水500～2500份。

优选的，根据重量份的原料包括：生苦荞/麦麸50份，琼脂15份，水1000～2000份。

一种谷瘟病菌的产孢培养基制作方法：将生苦荞/麦麸50g放入1000mL的水中煮沸30分钟，用双层纱布对溶液进行过滤，在滤液中放入15g琼脂，用微波炉加热直至琼脂融化后加水补足至1000mL。趁热倒入500mL三角瓶，每瓶200mL，将三角瓶放入高压蒸汽灭菌锅中于121℃下灭菌20分钟备用。接种前，用微波炉加热融化三角瓶中的固体培养基成为液体，待冷却至45～55℃培养基未凝固前倒入9mm培养基约2-3mm高(每皿约20mL)备用。

本发明根据病原真菌在不适条件下会促进分生孢子产生的特点，通过减少固体培养基中的营养物质，只采用了生苦荞/麦麸和琼脂创造不易的生长环境来提高谷瘟菌的产孢量，同时在制备该培养基时所选用的配方是将生苦荞/麦麸煮沸后弃去滤渣，将其中的营养成分溶解在清液中进行后面培养基的制备步骤。而生苦荞/麦麸所提供的营养可以保证菌丝体较快生长，从而能更快地进入具有产孢能力的阶段，缩短产孢时间并获得大量分生孢子。

与现有技术相比，本发明的有益技术效果：本发明采用生苦荞/麦麸和琼脂制备培养基，未加入一般真菌培养基常加的蔗糖成分，制备培养基原料易得、成分简单、制作简便、不易污染；同时本申请制备的培养基不需要额外进行任何形式光照处理，步骤简单；本申请制备的培养基产孢稳定，缩短产孢时间，降低了污染几率，提高了工作效率，节约了科研成本。