[发明专利]沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及病原微生物的检测技术领域，尤其涉及沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针、试剂盒及检测方法。所述试剂盒中包含CT/NG/UU保守区域特异的引物对和Taqman荧光探针，该试剂盒通过实时荧光定量PCR，能准确地将CT/NG/UU感染样本检测出来，使用方便快捷，灵敏度高，特异性好，重复性强。

技术领域

本发明涉及病原微生物的检测技术领域，尤其涉及沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针、试剂盒及检测方法。

背景技术

性传播疾病(Sexually transmitted diseases,STD)是指通过性接触可以传染的一组传染病，在中国，人们简称为性病。作为一种社会性疾病，STD不仅给患者造成不同程度的身体损伤，同时带来精神痛苦，还给配偶、子女、家庭带来不幸，给社会和国家造成严重的损失。感染STD疾病的患者，男性可导致附睾炎，精索炎进而致不育，女性可引起盆腔炎、输卵管炎、子宫内膜炎、异位内膜炎、异位妊娠、流产等。其中沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟氏菌(NG)、脲原体(UU)三种病原体感染已经成为STD的主要的致病病原体。因此，沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟氏菌(NG)、脲原体(UU)的及时诊断对防控性传播疾病至关重要。

沙眼衣原体Chlamydia trachomatis分为3个生物型，即小鼠生物型(biovarmouse)、沙眼生物型(biovar trachoma)和性病淋巴肉芽肿生物型(biovarlymphogranuloma venereum,LGV)，后二者与人类疾病有关。用间接微量免疫荧光试验，沙眼生物型又分A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、 K14个血清型，LGV生物型又有L1、L2、L2a、L34个血清型。其中A、B、Ba 及C型的衣原体株能引起沙眼，L1、L2、L3型能引起性病性淋巴肉芽肿，D-K 型则引起非淋菌性尿道炎。沙眼衣原体是引起非淋菌性尿道炎的主要病原体，由前述可知，非淋菌性尿道炎的40％～50％是由沙眼衣原体感染引起的。沙眼衣原体感染目前已是西方国家最常见的性传播疾病之一，发病人数增加很快，已超过淋病。在中国，沙眼衣原体感染的患病人数也在迅速增加。

人类是淋球菌唯一的自然宿主，淋病主要由性接触而传播。淋球菌侵入泌尿生殖系统繁殖，男性发生尿道炎，女性引起尿道炎和子宫颈炎。如治疗不彻底，可扩散至生殖系统。胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎。人类对淋球菌无自然免疫力，均易感，病后免疫力不强，不能防止再感染。

脲原体经尿道感染后患者可出现尿道炎症状，并可继发慢性前列腺炎。在检查前列腺液时，可见活泼、泳动的微生物群体。脲原体还继续感染精道、精囊和睾丸，影响精子和精液的质量，引起不育。

目前，沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟氏菌(NG)、脲原体(UU)(简称为CT/NG/UU)的检测方法主要有细菌的分离培养、免疫学诊断和分子生物学诊断，三种方法具有以下特点：

1)病原体的分离培养是CT/NG/UU的金标准，但分离培养法对技术要求较高，费用较昂贵，耗时长，在临床检测中应用不多。

2)免疫学诊断诊断还存在滞后性，不能准确反映当前是否感染或携带病原体，难以满足早期诊断的要求。

3)病原体核酸检测：具有快速、准确、检测窗口短、高灵敏度等优点，能够对CT/NG/UU作出早期诊断，给疫情的快速分析和控制提供有力的技术支撑。

其中实时定量PCR检测平台已成为最简捷和可靠的核酸检测方法，在目前国内外的核酸诊断中应用最为广泛，检测原理为，检测探针为包括5’端报告基团和3’端淬灭基团的寡核苷酸，当探针完整时，由于淬灭基团靠近报告基团而极大降低了报告基团发出的荧光，引物延伸时，与模板结合的探针被 Taq酶(5’→3’外切核酸酶活性)切断，报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号。在每次PCR循环中，都有新的报告基团被剪切，因此荧光信号强度的增加与扩增产物的数量成正比，可实时监控扩增情况。