[发明专利]一株罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株05172G12，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号CGMCC No.14704。本发明筛选出二种细胞融合后的杂交细胞，再经过间接竞争酶联免疫法筛选细胞并三次亚克隆，最终得到一株罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对罗格列酮具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为2.7 ng/mL），可实现对保健食品中罗格列酮残留量的检测，为食品中罗格列酮残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

罗格列酮（Rosiglitazone）通过提高胰岛素的敏感性而有效地控制血糖。其作用机制与特异性过氧化物酶体增殖因子激活剂的γ型受体（PPARγ）有关。通过增加骨骼肌、肝脏、脂肪组织对胰岛素的敏感性，提高细胞对葡萄糖的利用而发挥降低血糖的疗效，可明显降低空腹血糖及胰岛素和C肽水平，对餐后血糖和胰岛素亦有降低作用。这种药物的开发和使用为2型糖尿病患者尤其是伴有胰岛素抵抗的2型糖尿病患者的治疗提供了一种新途径。由于我国糖尿病人的增长速度较快，我国的糖尿病非处方药、保健食品市场也是种类繁多，其中不少鱼龙混杂，尤其是一些标榜纯中药却非法掺加西药成分情况最为常见。

近期有关长期使用罗格列酮的严重不良反应报道一直广受关注，有报道称2型糖尿病或糖耐量受损者长期服用罗格列酮面临着发生心脏病或心力衰竭高风险的问题。除此之外，长期服用该药还会有肝功能异常、头晕、头痛、腹泻等不良反应。合并使用其他降糖药物时，有发生低血糖的风险。老年患者可能有轻中度水肿及轻度贫血。

目前，食品中罗格列酮残留量的检测方法没有国家标准。这给罗格列酮食品添加剂生产使用和进出口贸易以及食品卫生监测工作带来很大的困难。为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对罗格列酮的高效、快速的检测方法。针对罗格列酮的检测方法主要有：气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GCMS)、液相色谱-质谱法(LCMS)。仪器检测法存在样品前处理烦琐、检测时间长、需要贵重仪器等缺点。这些方法不适合大量样本的快速检测。酶联免疫分析方法（ELISA）是一种半定量的、简单、灵敏、快捷和高通量的检测方法，对于食品中药物残留的检测有重要意义。因此，建立高效的免疫学检测方法很有必要，而建立此方法的一个重要前提即需筛选出针对罗格列酮的高特异性单克隆单体。

发明内容

本发明的目的是提供一株罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株，由该细胞株制备的抗体对罗格列酮具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立罗格列酮的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株05172G12，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2017年9月5日，保藏编号CGMCC No.14704。

罗格列酮单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.14704的罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株05172G12分泌产生。

所述罗格列酮单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中罗格列酮残留的分析检测。

本发明提供的罗格列酮单克隆抗体杂交瘤细胞株05172G12的制备基本步骤为：

（1）半抗原结构：

结构类似物 Mol. Wt: 282.039