[发明专利]斑蝥素作为miR-214-3p/Wnt/β-Catenin信号通路抑制剂防治骨肉瘤的用途

说明书

本发明公开了斑蝥素作为miR‑214‑3p/Wnt/β‑Catenin信号通路抑制剂在制备防治骨肉瘤生长和转移药物中的用途。本发明提供了一种可用于预防和治疗骨肉瘤发生、发展、转移、耐药的新方法，可有效解决骨肉瘤患者死亡率高、存活期短的问题。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及斑蝥素作为miR-214-3p/Wnt/β-Catenin信号通路的抑制剂在预防和治疗骨肉瘤生长和转移方面的用途。

背景技术

骨肉瘤(Osteosarcoma，OS)，是最常见的原发性恶性骨肿瘤，有两个发病高峰，分别为10-14岁处于青春发育期的儿童/青少年和65岁以上老年人，儿童/青少年多发。骨肉瘤临床以疼痛、肿块、肢体活动障碍为主要症状，其临床病理改变为骨质破坏，表现为溶骨性，其病程改变具有恶性度高、异质性高、生长迅速、早期转移的特点。

由于骨肉瘤早期疼痛不明显，呈进展性改变，因此前期经常被误诊而延误病情的诊治。近年来随着新辅助化疗等多样化综合疗法的运用，患者5年生存率提高至60％-70％，但10％-20％骨肉瘤患者在确诊时即为转移性，其5年生存率只有20％，手术治疗后80％的患者出现转移。

由于骨肉瘤恶性程度高、发病因素复杂、发病机制尚不明确、缺乏临床有效治疗药物，以及广泛存在耐药性，对患者、家庭及社会造成巨大的痛苦和经济压力，因此寻找一种毒副作用较小且行之有效的治疗方法极为迫切。

斑蝥素(Cantharidin)是一种单萜类衍生物，其分子式为C₁₀H₁₂O₄，分子量为196.2，难溶于水，易溶于二氯甲烷、氯仿等有机溶剂，是斑蝥虫体主含化学成分，约为1％～1.2％，是斑蝥抗癌的有效成分和主要毒性成分。

Wnt/β-catenin信号通路是一条在生物进化中极为保守的通路。这条包括Wnt族基因及其产物与β-catenin基因等构成的极为复杂的信号通路控制了从果蝇到人类胚胎发育、细胞命运及组织器官形态形成以及肿瘤发生的诸多重大事件，Wnt/β-Catenin信号通路参与多种肿瘤细胞的发生发展。

MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20-25个核苷酸。miRNA参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。最近的研究发现，miRNA表达与多种癌症相关，大约50％得到注解的miRNAs在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点(fragilesite)。这说明miRNAs在肿瘤发生过程中起至关重要的作用，这些miRNAs所起的作用类似于抑癌基因和癌基因的功能。

发明内容

针对现有技术的上述不足，根据本发明的实施例，希望提供一种可用于预防和治疗骨肉瘤(osteosarcoma)发生、发展、转移、耐药的新方法，以有效解决骨肉瘤患者死亡率高、存活期短的问题。

本发明技术方案的提出基于：

1、确定了不同浓度斑蝥素处理骨肉瘤细胞143B和U2OS后，斑蝥素抑制骨肉瘤细胞的生物学特性：

(1)通过实时细胞仪检测，发现斑蝥素剂量依赖性抑制骨肉瘤细胞存活率、迁移和浸润；

(2)通过细胞克隆形成检测，发现斑蝥素剂量依赖性抑制骨肉瘤细胞克隆形成；

(3)通过流式细胞仪检测发现斑蝥素剂量依赖性使骨肉瘤细胞的细胞周期阻滞在G2/M期，通过western blot检测细胞周期关键蛋白表达，进一步确认了斑蝥素使骨肉瘤细胞的细胞周期阻滞在M期；

(4)通过流式细胞仪和western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达，发现斑蝥素剂量依赖性促进骨肉瘤细胞凋亡；