[发明专利]一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法

说明书

本发明提供了一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法，本神经元培养方法操作方法简单，具有较高的可重复性；通过使用专用背根神经节细胞培养基，背根神经节细胞生产效果好，保证了背根神经节细胞的纯度。本发明能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的SD大鼠背根神经节细胞，便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究背根神经节细胞的生理功能。

技术领域

本发明涉及一种细胞的分离纯化及培养方法，具体涉及一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法。

背景技术

背根神经节是各椎间孔内侧面附近脊髓背根的膨胀结节。由向心感觉纤维细胞构成。负责接收来自身体感受器的全部神经冲动，包括一般躯体感觉和内脏感觉，通过向心纤维，将它们传送到脊髓。是身体感觉的始发站。对背根神经节进行分离纯化培养，便于神经科学研究中细胞生物学实验的需求。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供了一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法，具体技术方案如下：

一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法，包括以下步骤：

DMEM/F12完全培养基配制：

超净工作台内取88ml DMEM/F12基础培养基于无菌、干净的瓶内，加入10ml FBS、1ml青链霉素双抗、1ml谷氨酰胺，0.22um过滤器过滤后转移至新的瓶内，盖紧瓶盖；瓶子上标明培养基名称、配制日期、配制人后缠紧封口膜，4度冰箱保存备用；

背根神经节细胞培养：

步骤A：无菌条件下仰卧放置新生SD大鼠于解剖液中，断头后打开胸腹腔，除去内脏器官；

步骤B：从颈部椎管开口插入显微剪，沿脊柱背侧中线两侧剪开椎管，去除暴露脊髓后，即在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧排列的背根神经节，用精细显微摄小心挑取，并剥除其被膜；

步骤C：将步骤B中剥离好的背根神经节转移至15ml离心管内，加入1ml0.25%胰蛋白酶37度消化15min，直至组织块呈絮状缠绕时立刻加入2ml DMEM/F12完全培养基终止消化；移液器吹打20次至无明显组织块为止；

步骤D：接种细胞至六孔板内，每孔接种10⁵个细胞，37℃、5%二氧化碳培养箱内培养；培养24h后细胞开始贴壁并长出形态，3d时细胞形态完全长开，培养至7d时培养完成；培养时第一天使用DMEM/F12完全培养基，第二天起更换Neurobasal A完全培养基。

本神经元培养方法操作方法简单，具有较高的可重复性；通过使用专用背根神经节细胞培养基，背根神经节细胞生产效果好，保证了背根神经节细胞的纯度。本发明能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的SD大鼠背根神经节细胞，便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究背根神经节细胞的生理功能。经我们的方法所分离纯化的背根神经节细胞，神经细胞的极性更为一致和均一，细胞胞体透亮，轴突细长，且呈现经典的神经元极性排列。经NSE免疫荧光染色鉴定为阳性。

附图说明

图1为本发明神经元细胞DAPI分析图；

图2为本发明神经元细胞merge分析图；

图3为本发明神经元细胞NSE分析图；

图4为本发明神经元细胞相差显微镜下分析图。

具体实施方式

实施例1：

1、完全培养基配制

（1）DMEM/F12完全培养基：