[发明专利]基于Ru(bpy)3

权利要求书

1.一种基于Ru(bpy)₃²⁺和Bi纳米棒自增强体系构建的唾液酸可再生电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1） 玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，再依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤，得到表面洁净的玻碳电极；

（2） 取3 μL浓度为5 mg/mL的C₆₀溶液于处理过的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，得到C₆₀修饰电极；随后，向修饰电极上滴涂3 μL 5 mg/mL TiO₂ 类八面体（TiO₂MCs），在红外灯下烘干，待冷却至室温后，得到TiO₂ MCs/C₆₀ 修饰电极；

（3） 滴加3μL 4-MPBA于步骤（2）所制得的修饰电极界面，并在室温下孵育40 分钟，4-MPBA通过Ti-S键自组装到TiO₂ MCs/C₆₀修饰电极表面，得到4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修饰电极；

（4） 取体积比为1:1的5 mg/mL金红石TiO₂介晶（N- TiO₂）溶液与1.0×10^-2 M钌联吡啶（Ru(bpy)₃²⁺）在室温下混合振荡6 小时, 使N-TiO₂表面吸附足够的发光试剂Ru(bpy)₃²⁺，离心、洗涤、再分散得到N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺复合物；向上述N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺复合物溶液中滴加100 μL 10 mM 的4-巯基苯甲酸（4-MBA）并在室温下搅拌1小时, 接着，再向所获得的混合溶液中加入200 μL5 mg/mL 的铋纳米棒Bi NRs，室温振荡40 分钟，离心、洗涤、再分散得到N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs复合物；随后，将浓度比为2:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）加入到上述获得的N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@BiNRs复合物溶液中，室温孵育50分钟后，滴加100μL 40 ng/mL 的唾液酸抗体（Ab）于所获得的混合溶液中，室温振荡40分钟 离心，洗涤，再分散制得N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab复合物； 最后，向上述N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab复合物溶液中滴加50μL 1 wt% BSA 封闭非特异性吸附位点，离心，洗涤，再分散，最终制得N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab-BSA复合物溶液作为电致化学发光探针，储存在4 ℃冰箱中备用；

（5）将步骤（3）制得的4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修饰玻碳电极浸入到不同浓度的唾液酸(SA）标准溶液中并在室温下孵育40 分钟，随后，用去离子水冲洗电极表面，制得SA/4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修饰玻碳电极，然后滴加3μL步骤（4）制备的电致化学发光探针N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab-BSA复合物溶液于SA/4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修饰玻碳电极，室温下反应40 分钟，用去离子水冲洗电极表面，制得N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab-BSA/SA/4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修饰玻碳电极；

（6）将步骤（5）制得的N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab-BSA/SA/4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修饰玻碳电极浸入到pH为6的PBS溶液中一段时间，SA与4-MPBA形成的硼酸酯键解离，致使SA及与SA连接的ECL探针脱离电极界面，得到pH 诱导的自清洁电极。